Obtention de l’animal transgénique

Préalablement, les souris donneuses et celle porteuses sont préparées pour l’opération de transgénèse.

On va stimuler avec des hormones les souris donneuses d’embryons pour qu’elle produise plus d’ovules. Puis on les accouple avec des mâles fertiles juste avant l’opération, car la transgénèse se réalise au stade unicellulaire de l’embryon, c’est-à-dire que les cellules n’ont pas encore eu le temps de se diviser. On fait cela afin que le gène modifié se trouve dans toutes les cellules de l’embryon et plus précisément dans les cellules reproductrices, le but étant qu’il soit transmis aux générations suivantes.

Les souris porteuses sont accouplées avec des mâles stériles, ce qui prépare leur oviducte et utérus à recevoir les embryons.

L’opération :

On tue les souris donneuses pour récupérer leurs embryons, situés dans l’oviducte lui-même se trouvant entre l’ovaire et l’utérus. On coupe donc les oviductes de toutes ces souris. On les place dans les goutes d’un liquide qui servira à détruire le cumulus cellulaire des embryons. Pour faire sortir les embryons, on travaille sous loupe. On déchire l’ampoule de l’oviducte et les embryons sont expulsés. Après quelques minutes pendant lesquels le liquide désintègre le cumulus cellulaire, on retire les embryons puis on les rince dans un second liquide le premier pouvant être nocif aux embryons à moyen terme. Une fois propres les embryons sont placés à l’incubateur dans un milieu de reproduction M16.

La micro-injection des transgènes se réalise sous microscope, on utilise des pipettes de contention (pour tenir l’œuf) et d’injection (pour injecter le transgène) contrôlées par des micromanipulateurs, tout cela se réalisant sur une « chambre d’injection » (huile + M16).

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Les œufs se font injecter les transgènes un par un. Pour cela on insère la pipette d’injection jusque dans le noyau et y envoie le gène modifié. Durant toute la micro-injection l’œuf est maintenu par la