SVT Term S Spécialité
Claude Lizeaux • Denis Baude

Protocole expérimental
Partie

3 - Chapitre 1

La catalyse enzymatique

Une transformation catalysée par les enzymes
Le suivi plus précis de la réaction enzymatique au cours du temps
p. 167

◾◾Matériel
• Comprimé d’amylase
• Empois d’amidon à 1 g.L1
• Solution d’eau iodée
• Compte-goutte

• Fiole jaugée 50 mL
• Pilon et mortier
• Cuve de spectroscopie
• Interface EXAO avec turbidimètre ou colorimètre

◾◾Préparation
Solution enzymatique
- Broyer le comprimé d’amylase à l’aide du pilon et du mortier.
(Remarque : si l’on souhaite vérifier la présence de sucres réducteurs en fin de réaction, il est plus rigoureux d’enlever la pellicule enrobant les comprimés. Pour l’étude décrite ici, ce n’est pas nécessaire).
- Placer la poudre obtenue dans la fiole jaugée et rajouter de l’eau QSP 50 mL.
- Agiter jusqu’à dissolution complète.
Coloration de l’empois d’amidon
- En fonction de la qualité de l’eau iodée, les dosages pourront être différents. Il faut noter que si la concentration en eau iodée est trop importante la réaction enzymatique est inhibée.
- De bons résultats ont été obtenus ici en ajoutant quelques gouttes d’eau iodée (2 à 5) dans un bécher de
250 mL d’empois d’amidon à 1 g.L1.
- La couleur finale obtenue doit être un bleu marine transparent. Si la solution est opaque, la concentration en iode inhibe la réaction.
Calibrage du colorimètre
- L’absorbance maximale de l’amidon est obtenue pour des longueurs d’onde proches du rouge.
- Le maximum d’absorbance (100 %) est réglé en utilisant la solution d’amidon préalablement préparée.
- Le « blanc » (0 % d’absorbance) est réglé en utilisant une solution dans laquelle la réaction entre amylase et amidon s’est déjà produite depuis plusieurs minutes (510 min.) dans les conditions expérimentales décrites ci-dessous. Une cuve contenant une telle solution peut avoir été préparée à l’avance.
Configuration de l’acquisition
La durée d’acquisition doit être de 5 minutes ou