Strat"gie

1074 mots 5 pages
PROTOCOLE PRODUCTION D’ASCITE CHEZ LA SOURIS

La production d’anticorps monoclonaux par le biais de liquide d’ascite doit être effectuée de manière appropriée et justifiée eu égard à la douleur et/ou la détresse potentielles qu’elle peut générer chez l’animal. Aussi le recours à cette méthode devra se faire dans la mesure où ces anticorps ne peuvent être produits par une méthode in vitro.
Le protocole qui est présenté ci-dessous permet de minimiser l’inconfort de l’animal et peut être considéré comme non douloureux. Par conséquent, sa mise en œuvre ne nécessite pas une déclaration en tant qu'expérimentation douloureuse auprès du préfet du département dans lequel se trouve l’établissement d’expérimentation animale.

Amorce intra péritonéale
On utilisera de préférence l’adjuvant incomplet de Freund ou un autre adjuvant moins invasif à la dose maximale de 0.3 ml par souris en une seule injection. Dans le cas de l’utilisation de pristane, le volume maximum injecté en intrapéritonéal sera de 0.2 ml par animal et devra être précédé au moins 10 mn avant par l’injection en sous-cutané de buprénorphine (0.05 à 0.1 mg/kg) pour son action antalgique.

NB: pour réaliser une dose de 0.05 mg/kg de buprénorphine pour une souris de 20g, utiliser une ampoule de 1ml dosée à 0.3mg/ml diluée dans 19 ml de soluté de Na Cl 0.9% et injecter 3 UI (seringue à insuline ) de cette dilution en sous-cutané. Selon l’évaluation de la détresse de la souris, on peut injecter jusqu’à 5 UI. La dilution ainsi préparée peut être conservée pendant 24 heures au réfrigérateur.

Injection intra péritonéale des hybridomes
L’injection des 106 à 107 cellules peut s’effectuer le lendemain de l’amorçage dans le cas où l’adjuvant de Freund a été utilisé. Dans le cas du pristane il faut attendre 10 à 14 jours avant l’injection des hybridomes.

Surveillance des animaux
Les souris doivent être pesées au moment de l’inoculation puis, lorsque la pratique le permet (notamment dans le cadre d’effectifs

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