Structure diholoside

Pages: 5 (1250 mots) Publié le: 7 octobre 2012
1/ But :

Le but du TP est de déterminer la composition et la structure d’un diholoside B grâce à la spécificité d’action de
glycosidases et de tester grâce a la liqueur de Feeling, la réduction éventuelle des sucres.

2/ Principe :

1) Principe de la chromatographie sur couche mince :

La chromatographie sur couche mince est une technique de séparation de constituantsà partir d’un mélange.
Elle comprend deux phases :
-Stationnaire : gel de silice qui est polaire
-Mobile : un solvant (mélange acétone-eau) qui entraine les composés à migrer le long de la phase stationnaire.
Des dépôts sont réalisés sur la phase stationnaire que l’on plonge dans la phase mobile afin de provoquer une migration des dépôts s’effectuant par capillarité. Les constituantspolaires migrent peu voir ne migrent pas, alors que les constituants apolaires migreront car ils sont entrainé par le solvant apolaire.
La distance de migration dépend de l’affinité que les constituants ont avec la phase stationnaire et la phase mobile.


2) principe du réactif de Fehling

La fonction du réactif de Fehling est de mettre en évidence la présence d’aldose et de sucresréducteurs.
En effet, la liqueur de Fehling est une solution contenant des ions cuivre, de couleur bleue en milieu basique. Cependant, en présence d’une substance réductrice et de la chaleur en milieu alcalin, la liqueur de Fehling donne un précipité rouge d’oxyde de cuivre due à la réaction de cuivre de la liqueur avec le groupement aldéhydique libre de l’ose.

R-CHO + 2Cu2+(aq) + 5HO-(aq)→ RCOO- + Cu2O(s) + 3H2O


3) Principe des glycosidases

L’hydrolyse enzymatique par les glycosidases entraine la rupture de la liaison osidique.
Les glycosidases appartiennent à la famille des hydrolases qui catalysent la réaction de dégradation de la liaison osidique. On utilise une solution tampon afin de maintenir le ph à une valeur constante.








||série |anomérie |rôle |
|Beta-D-glucosidase |D |Beta |Attaque beta-glucosides et libère la bêta-D-glucose d’un diholoside |
|Alpha-D-glucosidase |D |Alpha |Catalyse l’hydrolyse  de la liaison 1,4 alpha glucosidique avec || | | |libération d'alpha-glucose |
|Beta-D-galactosidase |D |Beta |Catalyse de diholoside et libération d’alpha-galactose |
|Beta-D-fructofuranosidase |D |Beta | Rupture des liaisons beta-fruranosiques|



3 / Résultats et interprétations :

• Glc : Témoin D- Glucose (10 dépôts)
• Gal : Témoin D-Galactose (10 dépôts)
• Fru : Témoin D-Fructose (15 dépôts)
• 1 : Témoin sans enzyme (8 dépôts)
• 2 : Diholoside + beta-D-fructofuranosidase (8 dépôts)
• 3 : Diholoside+ Beta-D-glucosidase (8 dépôts)
• 4 : Diholoside+Alpha-D-glucosidase (8 dépôts)
• 5 : Diholoside+ Beta-D-galactosidase (8 dépôts)
• Mélange de D-glucose + D-galactose + D-fructose






















































Calcul des Rapport Frontaux (Rf) :


|Glc |Gal |Fru |1 |2 |3 |4 |5 |Mélange | |d (cm) |2.8* |2.1 |5 |1 |1.2 |0.4 |2.6 |1.3 | | |D (cm) |8.2* |8.2 |8.2 |8.2|8.2 |8.2 |8.2 |8.2 |8.2 | |Rf |0.34* |0.26 |0.61 |0.12 |0.15 |0.05 |0.32 |0.16 | | |Nous et un autre groupe n’avons pas eu de tache car il n’y a eux un problème dans la solution de glucose, mais théoriquement on aurait du avoir une tache dont le rapport frontal est ci-dessus.

Calcul du rapport frontal : Rf= d/D

d : distance à partir de la ligne de dépôt jusqu’au milieu de la tache. (en...
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