USJ1
Année 2022 – 2023

Licences
Sciences de la Vie et de la Terre-Biochimie et Chimie

Pr Richard G. Maroun
EFMBL4
Travaux dirigés Enzymologie fondamentale et moléculaire 2
TABLE DES MATIERES

I- Interaction protéine-ligand : caractérisation des sites de fixation page 3
II- Enzymes michaeliennes page 4

III- Inhibiteurs enzymatiques page 8

IV- Enzymes allostériques page 16

V- Cinétiques à plusieurs substrats page 19

VI- Étude des sites actifs …afficher plus de contenu…

L’enzyme réisolée ne porte pas de radioactivité. Si on la met en présence de 3H-succinate on obtient la formation de succinyl-CoA tritié. Conclusions ? 2ème Exercice
La créatine kinase du muscle catalyse, en présence de Mg2+, la réaction (1) : (1) créatine + ATP2- + Mg2+ ↔ ADP- + phosphocréatine + H+ La phosphorylation de la créatine peut être mesurée à l’aide d’un système couplé faisant intervenir les 2 réactions suivantes : pyruvate kinase
(2) ADP + phosphoénolpyruvate + Mg2+ ATP + pyruvate lacticodéshydrogénase
(3) pyruvate + NADH + H+ lactate + …afficher plus de contenu…

En électrophorèse sur gel de polyacrylamide en présence de SDS et d’urée la protéine semble également homogène et la masse moléculaire apparente est de 80000 Da. Quelles hypothèses peut-on formuler sur la structure de E ? (6 points)

2- On réalise par la suite, en milieu non dénaturant, une chromatographie sur colonne échangeuse d’ions (DEAE-cellulose) de l’enzyme pure. Les profils d’élution obtenus pour l’absorbance à 280nm (trait plein) et pour l’activité enzymatique (pointillés) sont montrés sur la figure 1. Nous rappelons que les acides aminés aromatiques des protéines absorbent à
280nm.

I
III
Absorbance à 280nm
Activité enzymatique II
0 20 40 60 80 n° de