Tp purification du lysozyme

1472 mots 6 pages

TP LYSOZYME 1995Licence SVT parcours Biochimie Techniques préparatives et analytiques en biochimie TP Purification du lysozyme p1
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PURIFICATION DU LYSOZYME Le lysozyme ou mucopolypeptide-N acétyl-muramylhydrolase est une enzyme hydrolysant les liaisons -1,4 entre l'acide N- acétylmuraminique et les résidus 2-acétamido-2 …afficher plus de contenu…

La molécule est une petite protéine de 129 résidus, de masse moléculaire relativement faible par rapport aux autres protéines du blanc d'œuf, et comprenant 4 ponts disulfures [6-127, 30-115, 64-80 et 76-94] lui conférant une bonne résistance à la dénaturation thermique. De plus elle se caractérise par un point isoélectrique élevé
(pHi = 11). C'est cette dernière propriété qui sera utilisée pour purifier la protéine à partir du blanc d'œuf par chromatographie d'échange d'ions. A titre indicatif les principales protéines contenues dans le blanc d'œuf et leurs caractéristiques sont indiquées dans le tableau ci-dessous : MM (Da) pHi % conalbumine 87 000 6,8 14 ovalbumine 43 000 4,6 65 ovomucoïde 28 000 4 9 lysozyme 14 000 11 …afficher plus de contenu…

Laisser décanter le gel (environ 15 min) et éliminer le surnageant.
Remettre le gel en suspension dans 30 mL de tampon et éliminer le surnageant comme précédemment.
Remettre enfin le gel une troisième fois en suspension dans 30 mL de tampon et procéder à une décantation rapide en centrifugeant la suspension pendant 2 min à 2000 g (Centrifugeuse VWR, frein position 2).
Vérifier le pH de la

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