PCR

cellulaires tumorales sont tuées par ces drogues avec une petite différence de sensibilité d’une lignée cellulaire tumorale à une autre (inférieur à 5 fold). Expression de facteurs pro et anti apoptotiques par les MPM et ADCa (Figure 2) On a mesuré par RT-PCR semi-quantitative l’expression de différents facteurs pro (Bak et Bax) et anti-apoptotiques (Bcl-2, Bcl-xL et Mcl-1) par les 8 lignées cellulaires tumorales. L’expression de ces facteurs est très variable d’une lignée cellulaire tumorale à une autre

Intro technique (objectifs du stage) tax à un effet dépendant du promoteur ? Effet de tax sur même minigène avec diffétent promoteurs Culture cellulaire transfections (minigène dans Cellules exprimant tax) extraction ARN / protèine RT-PCR (tax/actin/minigène) + gel + photo WB (tax) Effet de tax sur différents minigène avec le même promoteur Clonage minigène + paragraphe avant Développement du WB Résultats Conclusion/perspectives Sommaire : Introduction But : I

phénotypique) Avec ou sans PCR Type de marqueur : RFLP et PCR-RFLP Séquence répétées (Microsatellites) RAPD (PCR amorces aléatoires) AFLP (RFLP-PCR) SNP (changement d’une seule base) Séquençage → chez l’homme : 3,2 milliards de paires de bases, 3 millions de SNP différents entre 2 individus tirés au hasard, 95% SNP sans effet phénotypique. Savoir les étapes de la PCR  Le marqueur dépend de la question : Un locus ciblé, évaluation de la variation sans a priori : PCR, séquençage Histoire des populations

même approche peut être utilisée avec un fragment PCR A L’oligonucléotide A contient les 40 bases en amont de l’ATG du gène X L’oligonucléotide B contient les 40 bases en aval du codon stop du gène X URA3 B PCR et transformation X 5’ URA3 X 3’ double recombinaison X 5’ ATG X X 3’ STOP chromosome X 5’ URA3 X 3’ vérification par PCR Caviston et al. MBC 2003 Introduire une étiquette (tag) A tag PCR et transformation URA3 L’oligonucléotide A

détections 11: Afin de poser le diagnostic de la dengue, plusieurs examens de laboratoire existent : l’isolement et la caractérisation virale, la détection des IgM (Immunoglobuline M) ou des IgG (Immunoglobuline G) spécifiques de la dengue, la RT-PCR (Reverse Transcriptase-Polymérase Chain Réaction) et la détection de l’antigène Non Structural 1 (NS1). L’antigène NS1 est une protéine du virus de la dengue détectée dans le sérum des patients atteints de dengue en phase précoce (principalement du

traitement : ◦ Surveillance de la tolérance:J15, J30 et à la demande ◦ ◦ 3 - 6 sem. APRES L’ARRET: sérologie + antigénémie P24 ou ARN VIH plasmatique 3 mois APRES L’ARRET: sérologie 64 PCR chez le soignant ◦ si ALAT ◦ ou systématique à 1 mois Si positivation de la PCR ◦ contrôler par 2ème PCR ◦ si confirmation (Conférence de consensus ANAES 2002) soit traitement d’emblée ++ soit surveillance des ALAT et traitement si 65 Non vacciné / non répondeur: ◦ Immunoglobulines spécifiques

n’y a encore été apportée. SAHDIA : Et le sang révélé grâce au luminol peut-il être analysé ? ALICE : Oui, il est toujours possible de prélever de l’ADN d’un échantillon traité avec du luminol : les ingénieurs utilisent la technique du PCR. SAHDIA : Du PCR ?? NATHAN : Je crois savoir que c’est une étude de biologie moléculaire d’amplification in vitro, qui permet de copier en grand nombre, une séquence d’ADN à partir d’une faible quantité d’acide nucléique, et donc, de l’étudier. SAHDIA :

maladie Triplo X - L'hémophilie - la mucoviscidose - la myopathie - la bêta thalassémie - le diabète sucré Outils de diagnostics : Charge virale : nombre de particules virales contenues dans un échantillon biologiques (salive, sang…). Grâce à la PCR, technique centrale, on compte le nombre de virus dans l’échantillon : - VIH - Variole - Hépatite C - Grippe  Organismes génétiquement modifiés : OGM 1) Prélèvement de cellules et mise en culture 2) Insertion du gène sous forme de plasmide dans la

on the sequence of this human homolog, we designed a pair of oligonucleotide primers (GSP1, 5 -TGGAATGCGGCCCTGTGACAT-3 ; GSP2, 5 -AGCTGCATTTCCCACTTGAGCT3 ). The partial cDNA of human PAX4 was amplified with these primers by polymerase chain reaction (PCR) with human placenta Marathon-Ready cDNA (Clontech, Palo Alto, CA) used as template. Thermal cycling was accomplished with Advantage cDNA Polymerase Mix (Clontech) at an annealing temperature of 60°C. Reaction products were subcloned and identified as

— 3 2.4 Méthodes génétiques.................................................................................. — 4 2.4.1 Sondes spécifiques............................................................................. — 5 2.4.2 Application de la PCR ......................................................................... — 5 3. Limites des méthodes rapides de microbiologie alimentaire................................................................................................. — 5 4. Conclusion