Violet Hill

identification. En effet, le violet de gentiane se fixe sur des composants cytoplasmiques et après ce temps de coloration, toutes les bactéries sont violettes. Chez les bactéries à Gram négatif, la paroi, riche en lipides, laisse passer l'alcool (ou le mélange alcool + acétone) qui décolore le cytoplasme alors que, chez les bactéries à Gram positif, la paroi constitue une barrière imperméable à l'alcool et le cytoplasme demeure coloré en violet. Réactifs : - Violet de gentiane phénique - Lugol

Réalisation d’un frottis – Dépôt des bactéries sur la lame Réalisation d’un frottis – Séchage du frottis Réalisation d’un frottis – Fixation à l’alcool Réalisation d’un frottis – Flambage à l’alcool Coloration de GRAM – Coloration au violet de gentiane Coloration de GRAM – Mordançage au lugol Coloration de GRAM – Décoloration à l’alcool Coloration de GRAM – Coloration à fuchsine Coloration de GRAM – Séchage de la coloration V Manipulations : Premier jour 1) Prélèvement

classifier les deux types de bactéries présentes dans le yaourt, les lactobacilles et les streptocoques. On veut trouver, s’ils sont à Gram positif, ou négatif. 2) Matériel Matériel biologique - yaourt Matériel chimique - alcool (95%) - violet de gentiane - Lugol - Fuchsine - Eau distillée - Huile d’immersion Matériel physique - Lame/lamelle - Ensemenseur - Cristallisoir - 2 bâtonnets en verre - bec Bunsen - microscope - pipette 3) Déroulement de l’expérience D’abord

virage (pH) Couleur de l’acide Couleur de la base méthyl violet 0,1 – 2,6 jaune violet vert de méthyle 0,1 – 2,3 jaune bleu violet de méthyle 0,1 – 2,7 jaune violet rouge de crésol 0,2 – 1,8 rouge jaune cristal violet (ou violet de gentiane) 0,8 – 2,6 jaune bleu violet bleu de thymol (1er virage) 1,2 – 2,8 rouge jaune jaune de méthyle 2,9 – 4,0 rouge jaune bleu de bromophénol 3,0 – 4,6 jaune bleu violet rouge congo 3,0 – 5,2 bleu orange rouge orange de méthyle

en 2003. C'est également un activiste qui milite (et a aidé à créer) à LItPAC, un comité d'action politique soutenant le Parti Démocrate aux États-Unis. Personnages : -Les parents Baudelaire qui sont morts dans un incendie dans leur maison. -Violette Baudelaire l’aînée des filles de 14ans. Très douée pour inventer les engins les plus farfelus. -Klaus Baudelaire le cadet et l’unique garçon du trio de l’âge de 12ans. Qui aime lire. -Prunille Baudelaire la benjamine. Qui adore mordre -Mr Poe

de colorer les bactéries et de les distinguer à l'examen (le violet de gentiane (Gram +) ou la fuschine (couleur rose) (Gram -). Son avantage est de donner une information rapide sur les bactéries présentes dans un produit ou un milieu tant sur le type que sur la forme. Mode opératoire : * Réaliser un frottis  * Fixer la préparation à la flamme, puis laisser refroidir la lame. * Immerger les lames dans la solution de Violet de Gentiane pendant 1mm. * Immerger les lames dans du Lugol

milieux à ensemencer etc… Au terme du processus de coloration, les bactéries dites « Gram Négatives » apparaissent roses tandis que les bactéries dites « Gram Positives » sont colorés en bleu foncé/violet (rem : certaines bactéries telles que les Bacillus, apparaissent parfois roses et violettes sur le même frottis, on les dit « Gram labiles »  et les différences de coloration sont dues à des différences d’âge des bactéries) La coloration de Gram est une coloration qui teste l’alcoolo résistance

2-3-5-tétrazolium) permet d'obtenir les pigmentations suivantes : C. albicans : blanc (aspect crémeux) C. guilliermondii : rose-rouge C. krusei : blanc (aspect mat) C. parapsilosis, pseudotropicalis, pulcherrima et stellatoïdea : rose C. tropicalis : rouge-violet Gélose Columbia au sang * Usage : Utilisée pour la culture et l’isolement  de bactéries exigeantes n'ayant pas besoin de facteurs particuliers comme Streptococcus. * Composition et préparation : * Mélange spécial de peptones : 23 g

TP3 : Antibiogramme a) Identification du gram de la bactérie b) But et principe Préparer sur lamelle une coloration des Grams à l’aide de plusieurs solution : du violet de gentiane, du lugol, de l’éthanol à 70% et de la fuchsine de ziehl. Cette manipulation a pour but de révéler le type de gram de l’échantillon à tester et de savoir si ces souches sont des bacilles ou des coccis grâce à une observation au microscope. c) Résultats Le test de coloration de Gram révèle une coloration rose. J’en

lame entièrement séchée, la passer à la lame bleue du bec bunsen rapidement plusieurs fois pour fixer la préparation. Mode opératoire de la coloration: -Déposer quelque gouttes de cristal violet sur la préparation, laisser agir 30 secondes. -Déposer quelque gouttes de lugol sur le cristal violet, laisser agir 30 secondes. -Nettoyer la préparation à l'éthanol jusqu'à ce que le filet d'éthanol qui s'écoule de la lame soit transparent. -Rincer à l'eau. -Déposer quelque goutes de safranine