Coloration de Gram et observation au microscope de différentes bactéries

But de la manipulation:

Le but est d'apprendre à réaliser un frottis pour prélever des bactéries dans leur milieu afin de pouvoir les observer au microscope.
Le but est également d'apprendre à réaliser des colorations afin de déterminer si les bactéries possèdent une paroi Gram + ou Gram -.

Mode opératoire du frottis (excepté pour la préparation du 4 mars):

-Travail en milieu stérile (autour de la flamme bleue du bec bunsen, après désinfection de la paillasse à l'éthanol.)
-Déposer une goutte d'eau au centre d'une lame propre.
-Prélever des bactéries dans leur milieu avec l'öse préalablement flambée au bec bunsen.
-Déposer les bactéries dans la goute d'eau et homogénéiser avec l'öse.
-Flamber l'öse pour la stériliser.
-Faire sécher la goute avec la veilleuse du bec bunsen (poser la lame sur le dos de la main pour vérifier que la lame n'est pas trop chaude.)
-Une fois la lame entièrement séchée, la passer à la lame bleue du bec bunsen rapidement plusieurs fois pour fixer la préparation.

Mode opératoire de la coloration:

-Déposer quelque gouttes de cristal violet sur la préparation, laisser agir 30 secondes.
-Déposer quelque gouttes de lugol sur le cristal violet, laisser agir 30 secondes.
-Nettoyer la préparation à l'éthanol jusqu'à ce que le filet d'éthanol qui s'écoule de la lame soit transparent.
-Rincer à l'eau.
-Déposer quelque goutes de safranine sur la préparation et attendre 30 seconde.
-Rincer à l'eau jusqu'à ce que le filet d'eau qui s'écoule soit transparent.
-Tamponner délicatement avec de l'essuie tout pour enlever l'eau de la lame. Mode opératoire de l'utilisation du microscope:

-Enlever le plastique de protection.
-Mettre le condenseur en position haute et ouvrir le diaphragme.
-Régler le rhéostat à 0, allumer ensuite le microscope.
-Régler l'objectif sur 40x, placer sa lame sur la platine et mettre cette dernière au maximum de sa