Techniques d’étude et d’identification microbiennes :
Etude microscopique :
L’examen microscopique débute par une préparation à l’état frais.

1/ Etat Frais :
Cet examen permet d’apprécier la forme et parfois la mobilité des germes étudiés. Il faut éviter de confondre la mobilité d’une bactérie avec les mouvements de convention susceptibles de l’entraîner.  Technique : Cette préparation consiste à examiner les microorganismes vivants entre lame et lamelle. Une goutte de suspension bactérienne est déposée au centre de la lame, puis déposer une lamelle audessous en évitant de créer les bulles d’air. L’observation se fait par microscope optique aux grossissements x 10 et x 40.  Lecture : Cet examen permet de savoir si on a affaire à une bactérie, à un champignon filamenteux ou à une levure. Dans le cas des levures et moisissures, l’examen permet une étude morphologique satisfaisante. L’étude morphologique des bactéries nécessite la préparation d’un frottis coloré selon la méthode de la coloration de Gram.

 Principe :

2/ Coloration de Gram :
 But : Permet de diviser les bactéries en 2 groupes : Gram + (celles qui retiennent le violet de gentiane après le lavage à l’alcool), et Gram- (celles qui sont décolorées et prennent ensuite la couleur d’un second colorant).  Principe : Cette méthode est basée sur la différence de structure de la paroi chez les 2 groupes : forte proportion de lipides (20 %) chez les gram – et faible chez les Gram +. Le traitement par l’alcool extrait les lipides chez les Gram -, entraînant une augmentation de la perméabilité de la paroi et l’extraction du complexe iode/violet de gentiane : Ceci provoque la décoloration des organismes. Les parois des Gram + au contraire sont déshydratées par l’alcool : leur perméabilité diminue et le colorant ne peut être extrait.  Technique :  Préparation du frotti : prélèvement par une pipette pasteur ou une anse de platine de quelques gouttes ou une parcelle de la colonie à étudier et la