La méthode utilisée pour ce TP est une méthode physique : elle permet de suivre l’évolution dans le temps d’une grandeur physique dont la valeur dépend de la quantité de matière ou de la concentration d’un produit ou d’un réactif.

L'absorbance d'une substance est une grandeur physique, sans unité, notée A, qui caractérise l’aptitude de la substance à absorber le rayonnement, c’est-à-dire qui permet de mesurer la proportion de rayonnement absorbé. L’absorbance est mesurable à l’aide d’un appareil appelé le spectrophotomètre.
Pour une solution d’une espèce chimique X colorée « suffisamment diluée », l’absorbance A de cette espèce est proportionnelle à [X], concentration de l’espèce colorée pour une longueur d’onde donnée λ0 du rayonnement et pour une longueur l donnée de solution traversée :

A = [X] * l * ε (Loi de Beer-Lambert )

Où A est sans unité ;
[X] est exprimée en mol.L-1 ε, un coefficient qui dépend de l’espèce X et de la longueur d’onde λ0 qui est alors exprimé en mol.L-1 l, le trajet optique en cm

L’orthonitrophénol (oNP-OH) est un composé phénolique qui comporte un groupement nitro (NO2) en position ortho sur le cycle benzénique.
En milieu alcalin, la fonction alcool (-OH) est facilement déprotonée et la molécule d’orthinotrophénol (ONP-OH) est convertie en ion orthonitrophénolate (oNPO-) ; ion dont la solution est fortement colorée en jaune et présente un maximum d’absorption à 420 nm. Ce changement de coloration est très utile pour les suivis spectrophotométriques.

La spectrophotométrie est une méthode extrêmement courante qui consiste à mesurer l’absorbance d’une substance chimique donnée, généralement en solution. Plus l'échantillon est concentré, plus il absorbe la lumière dans les limites de proportionnalité énoncées par la loi de Beer-Lambert.
La densité optique des échantillons est déterminée par un spectrophotomètre préalablement étalonné sur la longueur d'onde (λ) d'absorption de la substance à étudier.
Le but de