Clonage de morceaux d'adn du phage lambda

3025 mots 13 pages
o57
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GROUPE de TD: 9

CLONAGE DE MORCEAUX D'ADN DU PHAGE LAMBDA

Résumé: Lors de ce TP de BIO 57, nous allons réaliser des clones de morceaux d'ADN du phage Lambda. Pour cela on utilise des vecteurs de clonages (içi un plasmide pBluescript) combinés avec notre ADN à cloner, on a donc des molécules recombinantes ,ou ADNrecombinants (vecteur + ADN lambda). Ensuite on les introduit dans des bactéries hôtes afin de les reproduire.
Au final on obtient des clones d'ADN lambda avec son vecteur de clonage, mais aussi des clones de vecteurs « vides » , c'est à dire sans ADN lambda.

INTRODUCTION

Le clonage d'un gène est une grande technique en biologie moléculaire , c'est une opération consistant à isoler un gène, l'introduire dans un vecteur et à le reproduire en grande quantité. Le clonage a des avantages qualitatifs (absence d'impureté dans le gène cloné) et quantitatifs (production de grandes quantités de gènes clonés).
Lors de ce TP nous allons essayer de cloner un morceau d' ADN du phage lambda, qui est un virus d' E.coli, dans le vecteur (plasmide) pBluescript.
Pour cela on doit réaliser une digestion du morceau d' ADN du phage lambda et du vecteur grâce à des enzymes de restrictions, une enzyme de restriction est une protéine en biologie moléculaire qui peut couper l'ADN au niveau d'une séquence de nucléotides caractéristique appelée site de restriction. Pendant ce TP nous allons utiliser les E.R ECO R1 et HIND III.
Le vecteur utilisé est un plasmide, c'est une molécule d' ADN circulaire capable de réplication autonome et qui confère la résistance à un ou plusieurs antibiotiques. De plus ces plasmides possèdent un seul site de coupure par une enzyme de restriction spécifique donc cela permet d'insérer un fragment d'ADN à cloner et de limiter la fermeture du vecteur de clonage sur lui même.
Ensuite on fait une ligation des fragments d'ADN du phage lambda dans le plasmide pBluescript grâce à une ligase. Une ligase est une enzyme qui

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