Microsoft Word - TP 1 .docx
Biochimie expérimentale 1 : Compte rendus TP1 :
Séparation de l’alanine et de l’arginine sur résine échangeuse d’ions

BUT : Le but de ce TP est de séparer deux acides aminés, alanine et l’arginine, d’un mélange alanine-arginine par chromatographie échangeuse d’ions, de type cationique. On effectuera par la suite un dosage spectrophotométrique afin de quantifier la concentration d’alanine présent dans le mélange à l’aide d’une coloration à la ninhydrine …afficher plus de contenu…

Nous allons faire quartes manipulations différentes lors de ce TP : • Une chromatographe échangeuse d’ions de type échangeuse de cations La chromatographe échangeuse d’ions, de type cationique ici, est une méthode de séparation de molécules chargées d’un mélange. Le critère de séparation de cette technique repose sur leur charge de surface globale. En effet, selon leurs charges, les …afficher plus de contenu…

On a une relation de proportionnalité entre l’absorbance et la concentration de la solution (et donc avec la masse).
À l’aide d’une solution témoins composé de la même molécule qu’on souhaite quantifier dans notre solution et dont les concentrations sont connues, on peut faire une gamme étalon et tracer une courbe d’étalonnagequi sera la représentation graphique de cette proportionnalité entre l’absorbance corrigée (étant l’absorbance lue – l’absorbance du blanc, le blanc étant une solution contenant toutes les espèces présentes dans notre solution sans la molécule que nous voulons doser, dans les même conditions expérimentales) et la concentration. Nous obtiendrons une droite linéaire dont nous pourrons calculer sa