1 Compte rendu TP ENZYMOLOGIE
Étude de la sélectivité de substrat sur la consommation de l’oxygène par la Glucose oxydase, avec l’électrode de Clark MEKACHER Nassim , KARUNAKARAN Gajeani
L3 Biologie santé, Groupe 3
MOT CLÉS :
Glucose oxydase
Activité enzymatique
Substrat
Dioxygène
ABSTRACT

Glucose oxidase (GOx) in a buffered reaction mixture oxidizes glucose by consuming oxygen. The objective of this practical work is to show the influence of the selectivity of the substrate …afficher plus de contenu…

2 Matériels et méthodes 1/ Préparation des solutions
Afin de déterminer l’activité spécifique expérimentale de l’enzyme, nous avons tout d’abord réaliser un tampon réactionnel d’un volume de 500ml composé de sodium acétate
(6,804 g) ainsi que d’eau physiologique, le Ph est ajusté à 5,5.
Nous devons maintenir le tampon réactionnel à une température de 25°C. Ensuite nous réalisons une solution de substrat, à une concentration égale à 20 KM
(constante de Michaelis), composé de 3,6 g de glucose compléter de 20ml d’eau distillé.
On réalise une solution mère enzymatique composé de 3mg d’enzyme compléter …afficher plus de contenu…

Dans la cuve nous mettons 1ml de solution tampon,
1ml de solution substrat et 6,5 μL de solution fille 2. Cette expérience est réalisée avec chaque substrat.
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RESULTAT

Dans l’objectif de déterminer KM et 𝑎𝑚𝑎𝑥 et montrer l'influence de la sélectivité du substrat sur l’activité enzymatique, nous déterminons tous d’abords la quantité d’enzyme qE.
QE a été déterminée à partir de l’activité spécifique théorique égale à 224890 U/g, soit 0,048μL /min donc
0,04 μL, cette concentration ne pouvant pas être pipeter on la dilue et nous avons 4 μL. Après ajustement par rapport aux résultats obtenus, nous avons obtenu un qE de 6,5 μL.
On mesure l’activité à qE, 0.5 qE et 2qE, nous obtenons ainsi les courbe suivante