Enzymologie
680 mots
3 pages
Institut supérieure de biotechnologie de Sfax Préparé par :
KHALED DONIA
Groupe : LAB 2-6
Année universitaire : 2013-2014
Compte rendu n°1 :
EXTRACTION DE LA FRACTION SOLUBLE DE LA LEVURE DE BOULANGERIE ET DOSAGE DES PROTEINES.
I. BUT :
Ce TP a pour but de : * Extraire la fraction soluble de la levure de boulangerie. * Doser les protéines présentes dans la fraction soluble par la méthode de Biuret.
II. Extraction de la fraction soluble de la levure de boulangerie :
La levure contient une enzyme, se trouvant dans sa paroi interne voire dans sa vacuole, qui est capable d’hydrolyser le saccharose : invertase. 1. Principe :
Il s’agit d’extraire la fraction soluble de la levure de boulangerie et puisque l’invertase est une enzyme intracellulaire, son extraction nécessite en primordial la rupture de la membrane cellulaire en effectuant une pression mécanique résultante par un broyage mécanique en présence de l’eau. 2. Mode opératoire :
On effectue un broyage mécanique en présence de l’eau durant 10min puis on réalise une centrifugation pendant 10min pour récupérer le surnagent contenant les molécules solubles des cellules et plus précisément l’invertase. 3. Résultats :
Le surnagent obtenu après la centrifugation, nous renseigne sur le volume total de la fraction soluble extraite. * VT = 17mL
III. Dosage des protéines par la méthode de Biuret :
Ce dosage se regroupe parmi les dosages colorimétriques des protéines. 1. Principe :
Pour toutes chaînes polypeptidiques contenant au moins deux liaisons peptidiques, il se forme un complexe coloré entre le réactif de Biuret et les liaisons peptidiques.
Ce complexe est de couleur violette. La couleur de la solution est proportionnelle à la quantité d’ovalbumine et à l’absorbance.
Ce type de dosage permet de mesurer les absorbances à 540nm. 2. Mode opératoire :
On prépare une gamme étalon avec une solution d’ovalbumine ayant une concentration connue