Purification et dosage de la phosphatase alcalinePurification et dosage de la phosphatase alcaline Dimère de la phosphatase alcaline d E.coli Table des matières
Fiche de synthèse
I. Genèse du projet ................................................................................................................. 1
II. Présentation du matériel et des méthodes ........................................................................... 2
II. 1. Estimation de la quantité de protéines par méthode …afficher plus de contenu…

Les professeurs, étant intéressés par l’étude de cette enzyme, nous ont donc conseillé de réaliser notre projet M58 sur la purification et le dosage par HPLC de la phosphatase alcaline. Avant la purification, nous avons récupéré des extraits des années antérieures conservés dans la glace préalablement. Nous avons calculé la quantité de protéines présentes dans ces extraits par la méthode de Bradford. Nous avons ensuite calculé l’activité enzymatique de la phosphatase alcaline par dosage enzymatique dans le but de choisir les échantillons d’extraits dont la concentration en protéines était la plus importante. Ces échantillons ont été ensuite purifiés. La purification a été réalisée à l’aide d’une résine Sépharose 4B déposée dans …afficher plus de contenu…

Cuve 29 15,32 2,28 1,14x10-2 4,28x10-3 7,44*10-4 0,00188 2,53
Le facteur de purification est obtenu par le calcul suivant : Facteur de purification =
𝐴𝑐𝑡𝑖𝑣𝑖𝑡é 𝑠𝑝é𝑐𝑖𝑓𝑖𝑞𝑢𝑒 𝑎𝑝𝑟è𝑠 𝑝𝑢𝑟𝑖𝑓𝑖𝑐𝑎𝑡𝑖𝑜𝑛
𝑎𝑐𝑡𝑖𝑣𝑖𝑡é 𝑠𝑝é𝑐𝑖𝑓𝑖𝑞𝑢𝑒 𝑎𝑣𝑎𝑛𝑡 𝑝𝑢𝑟𝑖𝑓𝑖𝑐𝑎𝑡𝑖𝑜𝑛 9 b) Echantillons E4 2015-2016