Transgenèse animale
Transgénèse classique
La transgénèse classique
Plan du cours
Introduction - Définitions - Bref historique - Bases Principe et différentes étapes - Construction du transgène - Introduction du transgène dans des ovocytes receveurs - Etablissement d’une lignée transgénique Les possibilités Conclusion
Définitions…
Transgenèse: Transfert d’information génétique (gène(s): fragment d’ADN exogène) dans un organisme = ‘transfert horizontal’; par opposition au ‘transfert vertical’, c-a-d d’un parent à sa descendance) Animal transgénique: Animal ayant intégré dans son patrimoine génétique un fragment d’ADN exogène ou transgène qui sera transmis à sa descendance.
Transgenèse classique
1963: Brinster
Bref historique
Mise au point des techniques de culture d’embryon 1968: Whitten Mise au point des conditions de culture d’embryon in vitro 196- : Heape Mise au point de la technique de réimplantation d’embryons 1981: Palmiter et Brinster Obtention de la première souris transgénique par injection d’un transgène dans des ovocytes.
Brinster
Palmiter
Transgénèse classique ou additive Les bases
Biologie du développement
Culture, manipulations et transfert d’embryons
Génétique moléculaire
Vectorologie
Transgenèse classique
Transgénèse classique ou additive
Première base: embryologie
(Jours) Stade 0.5 Ovocyte 1.5 Transgenèse par microinjection d’ADN dans le pronucleus d’ovocytes
2.5
Morula
Transfection virale (transgenèse additive)
3.5
Blastocyste
Transgénèse classique ou additive
Seconde base: génétique moléculaire Construction transgénique = Transgène + Vecteur
Transgène
Natif ADN Génomique Chimérique ou de fusion
Vecteur
Amplification Transfert
Virus Plasmide
+
Transgenèse Classique Principe
Femelle (4-6 sem) Injection PMSG (follicules)
J1
14h - 16h 46h d ’intervalle
SUPEROVULATION Injection hCG (ovulation) Mâle fertile
J3
12h - 14h
en soirée du J3
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