BRISSON TiphaineHAMIDI Al-Hadina TP Analyse avancée des Biomolécules L3 SV BM01Étude par spectrophotométrie de la dénaturation de la ribonucléase A pancréatique bovine par un agent chaotropique chimique I. IntroductionL’objectif des expériences suivantes est d’analyser l’altération de la structure moléculaire d’une protéine monomérique, la Ribonucléase A (RNase A) sous l’influence d’un agent dénaturant, le chlorure de guanidine par une méthode spectroscopique. L’étude de …afficher plus de contenu…

Sachant que la solution contenant la RNase a été diluée au 1/10 dans les échantillons, cela fait une concentration de 2,62.10-4mol.L.Tracé de l’absorbance (300 nm)= f(concentration de chlorure de guanidine):Courbe de dénaturation de la RNase A par ajout de chlorure de guanidine avec méthode …afficher plus de contenu…

Et vu qu’il y a 6 tyrosines au total, ça nous fait 5 Tyrosines qu’il est possible de titrer pour la RNAse A à l’état dénaturé. 2.3 Energie libre de dénaturation dans l’eau de la RNase Nous connaissons la formule ∆G(CGnd-HCl) = -RT ln Kéq(CGnd-HCl). La température en Kelvin choisi est de 293,15 qui correspond à 20°c.Il faut d’abord calculer les concentrations de tyrosine pour les concentrations de guanidine correspondant à la transition entre l’état natif et dénaturé.Exemple de calcul : à 2 mol.L de guanidine avec A300 = 0,122=.molC guanidine (mol.L)A300 nmCtyrosine (mol.L)K∆G