Agarose

d'agarose (à base d'algue) une "solution " d'ADN du bactériophage ( avant contact avec bactéries) une "solution" d'ADN du bactériophage ( extraite de bactéries infectées) Préparation du matériel: Gel d’agarose 1- Mélanger tampon TBE et agarose à raison de 0,8 g d'agarose pour 100 mL de tampon (la proportion d’agarose dépend de la taille des molécules d’ADN à séparer). 2- Faire fondre l'agarose au four à micro-ondes en surveillant pour éviter les projections ou au bain marie. Agiter de

permettent de maintenir le pH relativement stable. Ajout de la Zymolyase qui est une glucosidase qui permet la dégradation de la paroi cellulaire et incubation pendant 2min à 37°C pour une activité maximale de cet enzyme. Couler le mélange cellule et agarose (formation des plugs ,pour éviter la cassure mécanique des molécules d'ADN) ensuite recouvrir les plugs obtenus par le tampon CPE pendant au moins 2H ce qui permet de réellement amorcer la dégradation cellulaire. Remplacer le tampon CPE par le

Protocole A. Matériels Matériels et produits : Balance Erlenmeyer Bécher Four micro-onde Boites à pétri Feutre indélébile Micropipette P1000 Micropipette P200 Micropipette de 10 µL Spatule Vortex Sécheur sous vide Hotte aspirante Agarose Tampon Phosphate PBS 1x Solution de BSA à 10mg/mL Solution anti-albumine bovine Solution d’antisérum bovin total Solution de sérum bovin total Solution inconnue A Solution inconnue B Papier Parafilm Tube à hémolyse Tube Falcon Tube Eppendorf

on medication covered by the Personalized Medicine Program http://www.medcohealth.com How will Medco realize this DNA Test •Buccal swab test kit is sent •Technique: 1. PCR amplification 2. Restriction enzyme digestion specific of the drug Agarose-gel electrophoresis 3. Result is sent to the physician with explanation and drug protocol How will Medco realize this DNA Test Testing will be performed by Medco's lab. Why will Medco supply himself DNA test and not delegate? Technology

de l’ADN. Différentes possibilités mettant à profit ces divers outils sont présentées ci-dessous. * Mise en pratique de l’électrophorèse d’ADN sur gel d’agarose. * Préparation du matériel : Gel d’agarose 1- Mélanger tampon TBE et agarose à raison de 0,8 g d'agarose pour 100 ml de tampon (la proportion d’agarose dépend de la taille des molécules d’ADN à séparer).  2- Faire fondre l'agarose au four à micro-ondes en surveillant pour éviter les projections ou au bain marie. Agiter de

250 mM - SDS 0,5% (p/v) - Eau pure stérile et froide - Isopropanol ou éthanol 70% - Enzyme EcoRI à 12U/µL - Tampon 10X - BSA à 10 mg/mL - Solution de charge - Rnase - ADN du phage - Dnase I - Ladder -BET à 0,5 µg/mL - Tampon TBE 5X - Agarose 0,8

CGTCGCCGTCCAGCTCGACCAG 3’ EGFP_C_primer 5’ CATGGTCCTGCTGGAGTTCGTG 3’ 20µL de tampon de digestion 10x 10µL de standard de poids moléculaire d’ADN 1kb Tampon TBE 1X (préparé à partir de tampon TBE 10X) 1mL de tampon de chargement d’ADN ddH2O (purifiée MilliQ) Agarose (Lot 100107, préparé 21-09-10, Exp : 01-15) Tubes eppendorfs DNAse-free Embouts stériles pour micropipettes p20 et p1000 Tubes PCR Pipettes pasteur stériles Rack, pour Eppendorfs et glace, 50 tubes, VWR catalog No. 60986-424 Nunc styrofoam -20°C

d'agarose : cette séparation s'effectue à travers la matrice du gel d'agarose ; les molécules de plus petites tailles se déplacent plus rapidement et migreront plus loin que les molécules de tailles supérieures. [pic] [pic] Agarose : Macromolécule à base d'agar purifié. L'agarose est extrêmement pur une fois purifié et il est ainsi utilisable dans la biologie moléculaire. Ensuite on fait une dénaturation de l'ADN par la soude pour obtenir de l'ADN monocaténaire. Après on

mesure que de nouvelles procédures et de nouvelles technologies sont devenues disponibles, les anciennes sont rapidement abandonnées. Des exemples typiques sont les méthodes pour déterminer la taille des molécules d'ADN. Avant l'électrophorèse, avec agarose et polyacrylamide, on calculait la taille de l'ADN par sédimentation dans des gradients sucrés, une technologie lente et laborieuse nécessitant une instrumentation coûteuse ; et avant les gradients sucrés, on utilisait la viscométrie. Indépendamment

restriction 3Matériel et produits Voici le matériel que nous utiliserons au long de ce travail pratique ; Matériel | Produits | Micropipettes et embouts 0.5-10µl et 20-200 µl | 1 x tampon TBE | Microtubes Eppendorf 1.5 ml | Agarose en poudre | Support pour microtubes | Solution de bromure éthidium à 0.5µg/ml | Bloc chauffant | Solution d'ADN 1 et 2 | Centrifugeuse | Tampon de charge (blue/orange loading dye 6 x) | Cuve pour électrophorèse