Agarose

C activée. Après : -Extraction de l’ADN -Amplification d’un fragment de l’exon 10 du FV par PCR * Etude du polymorphisme de longueur de fragments de restriction (RFLP) : utilise l’enzyme de digestion MNL1 puis migration des fragments en agarose permet de différencier le sujet normal du patient hétérozygote ou homozygote. * D’autres techniques utilisant des sondes spécifiques de la mutation sont utilisées (ASO). e. Recherche de la mutation II Leiden * Pas de tests phénotypiques

un retard de croissance. Les signes osseux radiologiques constants. GAG GTG Glu Val D – Analyses biologiques -Test de la falciformation (test d’Emmel) - Electroforèse de l’hémoglobine: (Acétate cellulose tampon basique, agarose, pH acide) - Electrofocusing - HPLC, - PCR 1 - Test di falciformazione (test d’Emmel) Hématies Sens de la migration Sens de la migration Abs 234 nm 4 - Chromatographie des chaînes à la naissance Temps Diagnostic moléculaire

moléculaire. L’ensemble de ces considérations est illustré schématiquement dans la figure 2.6. Types de gels - Gels hydratés (les plus utilisés) : le SéphadexTM (G10 à G200) qui sont des polyosides bactériens de type dextran et le SépharoseTM (agarose). Le gain d’eau correspond au nombre de grammes d’eau fixés par gramme de substance sèche. - Gels permanents : Ce sont des copolymères organiques ou bien des minéraux (silice). Ici, des effets d’adsorption s’ajoutent au tamisage moléculaire

amplifiée correspond à la taille du fragment d’ADN situé entre les amorces. La PCR avec amorces universelles constitue donc une première approche pour établir l’inventaire de maladies à phytoplasmes dans une région donnée. gel de metaphor agarose ou de polyacryappartien- lamide, le polymorphisme des fragments amplifiés et digérés si les maladies étudiées nent à des groupes différents. Cas d’études épidémiologiques Lors d’études épidémiologiques faisant intervenir

Child 83: 248–250.  Shin­Buehring YS, Schaub J (1980) Pitfalls in the radioactive method  of galactose­1­phosphate uridyltransferase activity measurement.  Clin Chim Acta  106: 231–234.  Shin YS, Niedermeier HP, Endres W, Schaub J, Weidinger S (1987)  Agarose gel isofocusing of UDP galactose pyrophosphorylase and  galactose­1­phosphate uridyltrasferase. Developmental aspect of  UDP­galactose pyrophosphorylase. Clin Chim Acta  166: 27–35.  Stambolian D (1988) Galactose and cataract. Surv Ophthalmol 32(5): 

complémente le mutant Δhxt1-7 et lui permet Figure 17: Localisation spatiale des transcrits Ufhxt1 et de la protéine UfHXT1 d‟U. fabae. A: Schéma des structures d‟infection d‟U. fabae. B: Gel d‟agarose coloré au bromure d‟éthidium, utilisé comme contrôle du Northern blot en « C ». C: Northern blot du gel d‟agarose « B », hybridé avec une sonde spécifique du gène Ufhxt1. 1: urédospores (SP); 2: tubes germinatifs (GT); 3 à 6: structures d‟infection obtenues in vitro, 3: appressoria (AP), 4: vésicules substomatiques

d’agarose doit être adapté à la taille des produits PCR mais aussi à la différence de taille entre chacun d’entre eux. Plus cette différence est faible, plus la teneur en agarose sera élevée pour accentuer leur séparation. Généralement pour des amplicons dont la taille est comprise entre 300 et 700 pb, un gel à 2 % (p/v) en agarose est suffisamment résolutif pour observer des différences de migration de fragments variant de quelques dizaines de paire de base. Des gels d’acrylamide peuvent également

d'absorption atomique Méthodes électrochimiques (ISE) Méthodes immunoenzymatiques : ELISA compétition ELISA sandwich EMIT Radio-immunologie : Emission bêta Emission gamma Chromatographies: CCM Colonne CPG HPLC Electrophorèses : Acétate de cellulose Agarose Electrofocalisation Capillaire Biologie moléculaire : Préparation d’ADN PCR Electrophorèse ADN Enzymes restriction Résidanat de Biologie Clinique 19 PCR en temps réel Séquençage Automates Analyseurs de Biochimie (spécifier) : …………………

biologiques - purifier la forme active d'un produit de son dérivé inactif - séparer des traces de molécules biologiques de grandes quantités d'impuretés. VI.5.1. Principe Un ligant biospécifique est fixé par liaison covalente à une matrice (dextrane, agarose) sans perdre son affinité pour le produit à purifier. A Li + P K= A Li P KD A Li P Li-P Li P agent de pontage ligand produit à purifier constante de dissociation Tout composé peut servir de ligand pour purifier les produits qui sont à même

dextrane/acrylamide agarose agarose réticulé d'emploi (temp.°C) stabilité solvants sels chaotropiques I = instable biodégradable stable instable , urée I stable 2 2 - 11 4-9 3 - 14 120 120 40 120 Ultrogel A agarose Ultrogel ACA agarose/polyacrylamide 4-9 3 - 10 40 40 sels I, urée I, solvants I biodégradable Biogel A Biogel P 4-9 2 - 10 40 120 sels I, urée I, solvants I solvants I, oxydants I 1 - 14 120 stable agarose polyacrylamide