Northern blot

perpendiculaire au gel ou bien par effet buvard. L'étape suivante consiste à incuber la membrane avec la sonde choisie : Pour l'ADN et l'ARN (Southern et Northern blots respectivement), c'est une molécule d'ADN radioactif de séquence choisie complémentaire à la séquence que l'on veut détecter. Pour les protéines (Western blot) la sonde est un anticorps reconnaissant spécifiquement la protéine désirée. On fait ensuite subir un lavage à la membrane afin d'éliminer les sondes non

Analyse d’une région d’ADN L’ADN poly lit de 3’ vers 5’ Sur un chromosome les deux brins peuvent être matrice mais pas sur le même gène : ex PHOTO On cherche l’ARN pour voir si c’est transcrit. Dispo 46 : Analyse de la transcription Diapo 47 : Northern-blot : Technique basé sur l’hybridation moléculaire Diapo 48 : Protection à la RNAse RNAse c’est une enzyme qui dégrade des ARN simple brin. Ce qui n’a pas était détruit va être détecté pat électrophorèse. Détermination du +1 de transcription: Cartographie

in silico sont nécessaires, telles que des analyses de clustering pour regrouper les gènes présentant le même profil d'expression. Enfin, les résultats seront souvent confirmés gène par gène par des méthodes telles que la PCR quantitative ou le Northern Blot (transfert d’ARN). Les puces apportent principalement des données qualitatives (variation d'expression d'un gène) mais il est difficile de quantifier avec précision l'expression d'un gène avec la technologie des puces à ADN. Alors il existe aussi

L’HIS est un outil incomparable pour étudier l’expression des gènes. Elle est proche, dans son principe, des Southern et des Northern blots et repose, comme eux, sur l’hybridation d’une sonde d’acide nucléique (ADN ou ARN) marquée dont la séquence est complémentaire des acides nucléiques que l’on cherche à identifier et à localiser. Alors que les Southern et Northern blot se font sur des broyats de tissus, l’HIS s’effectue sur coupe histologique, apportant ainsi des informations précises sur la

transcriptionnel - Régulation fine par les facteurs de transcription (complexes protéiques) * Doigts à zinc * Fermeture éclaire à leucine - L ’essentiel du contrôle cellulaire de la Σ prot est transcriptionnel - Donc ARNm témoins de la Σ prot (Northern blot, RT-PCR) 4/ Synthèse protéique ● Traduction (ARNm → prot) ➔ Conditions nécessaires - Eléments nécessaires (cytosol) * AA * ARNm à traduire * ARN de transfert (ARNt) * Enzymes et facteurs de transduction * Ribosomes (complexes constitués de

d'entre eux avec des informations cliniques associées. Cependant, souvent des milliers de spécimens doit être analysé si les expériences visent à un haut niveau de signification statistique. Méthodes d'analyse génétique moléculaire telles que Northern multi-tissus ou Western des analyses de transfert, puces à protéines, ou highthroughput installations PCR en temps réel ont été utilisés à cette fin (1-4). Bien Ces techniques sont bien adaptées pour les analyses à haut débit, ils partagent

en 1/4 d'heure "Pacific biosciences" 9 Intérêt: Pouvoir observer les polymorphismes et parier à 70% sur les maladies qu'ont pourrait avoir, et prévenir ces maladies. --> Médecine prédictive. 3.3 Le southern Blot Technique de transfert d'ADN (d'ARN = Northern Blot, de protéines= Western Blot) sur une membrane à partir d'un gel d'électrophorèse. Objectif: détecter une séquence précise au sein d'un génome, (ex: mise en évidence de polymorphismes) On prend de l'ADN natif extrait de cellules ou tissus

forte stringence) est déconseillé. | ------------------------------------------------- Extraction des ARN La pureté et l'intégrité de l'ARN isolé sont des facteurs critiques pour sa bonne utilisation dans un certain nombre d'applications (Northern blot, synthèse d'ADNc...). Quelque soit la procédure d'extraction utilisée, 4 étapes importantes doivent être effectuées:  - l'ouverture efficace des cellules  -la dénaturation des complexes nucléoprotéiques  -l'inactivation des ribonucléases endogènes 

in silico sont nécessaires, telles que des analyses de clustering pour regrouper les gènes présentant le même profil d'expression. Enfin, les résultats seront souvent confirmés gène par gène par des méthodes telles que la PCR quantitative ou le Northern Blot. Les puces apportent principalement des données qualitatives (variation d'expression d'un gène) mais il est difficile de quantifier avec précision l'expression d'un gène avec la technologie des puces à ADN. L'utilisation des puces à ADN connaît

in silico sont nécessaires, telles que des analyses de clustering pour regrouper les gènes présentant le même profil d'expression. Enfin, les résultats seront souvent confirmés gène par gène par des méthodes telles que la PCR quantitative ou le Northern Blot. Les puces apportent principalement des données qualitatives (variation d'expression d'un gène) mais il est difficile de quantifier avec précision l'expression d'un gène avec la technologie des puces à ADN. Généralement, après une étude de puce