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Pages: 23 (5679 mots) Publié le: 24 juillet 2013
INTRODUCTION
Au cours de la dernière décennie, énorme
efforts ont été déployés afin de découvrir la structure
et la fonction du génome humain.
Avec l'achèvement du génome humain
projet de séquençage au début de 2001,
les séquences de base de dizaines de milliers
des gènes est devenue accessible au public,
et la technologie de la puce à ADNc émergents
offert une plate-forme à grandeéchelle
l'analyse du transcriptome. Pendant ce temps,
des centaines de publications ont rapporté
applications de cette technologie.
La comparaison des profils d'expression
entre les malades et non malades
tissus ont abouti à l'identification de
potentiellement des milliers de maladies liées à l'
gènes. Cependant, un inconvénient majeur
de la technologie des puces ADNc est que
échantillons detissus non fixés sont nécessaires.
Ces échantillons sont généralement prises à partir de
études prospectives et l'absence à long terme
suivi clinique informations. En outre,
ADNc à grande échelle basée sur la baie
Les analyses sont souvent un coût prohibitif.
Par conséquent, il existe un fort besoin d'
validation de gènes candidats prometteurs
sur tissus fixés au formol régulièrementarchivé
échantillons. Ces échantillons de tissus sont
disponibles en nombre presque illimité
dans les instituts de pathologie, beaucoup d'entre eux
avec des informations cliniques associées.
Cependant, souvent des milliers de spécimens
doit être analysé si les expériences visent à
un haut niveau de signification statistique.
Méthodes d'analyse génétique moléculaire
telles que Northernmulti-tissus ou Western
des analyses de transfert, puces à protéines, ou highthroughput
installations PCR en temps réel ont
été utilisés à cette fin (1-4). Bien
Ces techniques sont bien adaptées
pour les analyses à haut débit, ils partagent
l'inconvénient que les tissus doivent être
désintégré avant analyse. Il s'agit d'une
inconvénient important parce candidat
gènes peuvent être exprimées enmultiples
différents types de cellules, et il pourrait également
être important de distinguer le cellulaire
localisation des produits des gènes. En
technologies in situ tels que l'immunohistochimie
(IHC), de l'ARN par hybridation in situ
(ARN-ISH), ou de la fluorescence in situ
(FISH) sont donc optimal
pour l'étude de l'épidémiologie moléculaire.
Cependant, à grande échelle dans les tissus insitu
Les analyses ne sont pas pratiques et lent
lorsque les méthodes traditionnelles d'moléculaire
pathologie sont utilisés. En outre, il est
généralement pas possible de réduire de plus de
200 sections régulières d'un tissu
bloquer. Coupe des coupes de tissus traditionnels
pour un nombre élevé d'analyses in situ
serait donc épuiser rapidement précieux
les ressources de tissus. Poursurmonter ces
lacunes, nous avons récemment mis au point
la technique des tissus microréseau (TMA)
(7.5), qui est un avancement de
le bloc «saucisse» et «potable
techniques de paille "qui étaient auparavant
recommandé pour l'analyse multiple
différents tissus sur une glissière (8,9). Avec
la méthode TMA, des centaines de différent
échantillons de tissus minute sont placés sur un
lame de verrede microscope et soumis à
analyse conjointe par des méthodes in situ.
Tissue technologie des puces
La technologie TMA facilite considérablement
et accélère l'analyse in situ
des tissus, car il permet l'
l'analyse simultanée d'un maximum de 1000
les échantillons de tissu sur un seul microscope
lame de verre (7.5). Cylindres de tissus minute
(Diamètre typique: 0,6 mm) sont
enlevé descentaines de différent
blocs de tumeurs primaires (le «donneur»
blocs) et assemblés dans un arraylike
format vers un vide "destinataire"
bloc (Figure 1).
Sections des blocs TMA peut
être utilisé pour l'analyse in situ simultanée
des centaines de milliers de tissus
échantillons. Pratiquement tous les types d'analyse
qui peut être appliqué à des sections de tissu,
y compris IHC, FISH, ou...
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