Polyacrylamide

chaque tampon à partir des stocks suivants : - Phosphate 2X : 100 mM NaH2PO4 (200 mL) 600 mM NaCl - 1M Imidazole (100 mL) Electrophorèse de protéines en gel d’acrylamide par la technique SDS-PAGE La technique de migration en gel de polyacrylamide permet de séparer les protéines et leurs sous-unités dénaturées par le SDS selon leur masse moléculaire. Ne pas déposer des échantillons de force ionique élevée (par ex. : pas de protéines en sulfate d'ammonium !). La coloration au bleu de Coomassie

support avec un champs électrique. Ce support est un gel c’est le gel d’agarose (algue) mais aussi le polyacrylamide qui est synthétique. Les molécules d’ADN vont du - vers le + car on travaille a pH = 8 à 8,5 et les groupements phosphates sont ionisés. Les grosses molécules migrent moins que les petites. L’agarose est utilisé pour une taille supérieure à 1 000 nucléotides et le polyacrylamide une taille inférieur à 1 000 nucléotides. L’ADN étant incolore on le colore avec l’éthidium qui est

de bases ou nucléotides) | 4 | 200 à 800 | 5 | 80 à 200 | 8 | 40 à 100 | 11 | 10 à 50 |   % agarose | Taille des fragments à séparer(en Kb) | 0,6 à 0,8 | 1 à 20 | 0,9 à 1,2 | 0,5 à 7 | 1,2 à 1,5 | 0,2 à 5 | |     -Le gel de polyacrylamide: il est utilisé pour la séparation de petits fragments, c'est à dire moins de 1 000 paires de bases. Ses trois applications majeures sont:- la purification des oligonucléotides  de synthèse et l'élimination des nucléotides libres après leur marquage

(NuPAGE LDS Sample buffer, Invitrogen) pour une concentration finale de 5 µg de protéines par échantillons. Les échantillons sont dénaturés dans un bain-marie à 90°C pendant 10 minutes. 20 µl de chaque échantillon sont déposés sur un gel de polyacrylamide (Figure 8) à 4% pour le staking et 12 % pour le resolving. Ces concentrations sont utilisées en fonction du poids moléculaire de la protéine à étudier afin de les séparer des autres protéines sans qu’elle ne migre en dehors du gel. Les échantillons

grande qu’il est impossible de les considérer un à un. Par conséquent, c’est par catégories qu’ils seront traités ici, à quelques exceptions près. Acrylamide L’acrylamide présent dans l’eau potable provient essentiellement de l’utilisation de polyacrylamide comme floculant. Il s’agit d’un produit potentiellement cancérigène. Les techniques actuelles de traitement de l’eau ne permettent pas d’extraire l’acrylamide de l’eau traitée. Sa concentration doit donc être contrôlée en termes de teneur en acrylamide

flocs les particules colloïdales neutralisées auparavant par coagulation. Les membranes d’osmose inverse étant chargées négativement, il est recommandé d’utiliser des floculants anioniques ou non ioniques : - non ionique : polyacrylamide PM 7 = 105 – 107 - ionique : polyacrylamide partiellement hydrolysée PM = 104 – 107. Les doses des différents produits (coagulants, floculation) sont déterminées par la méthode du « JAR TEST ». 6 7 Kamel Fethi, Cheibi Habib – Desalination 136 (2001) – pages 263-272

FeSO4 : 15-300 mg/L 5-300 mg/L 15-300 mg/L • Cations organiques: mélanine formol, épichlorhydrine, polychlorure de diméthylamine 5-50 mg/L – Floculation • Minéraux : silice, argile, poudre de charbon actif • Organique : alginates, amidons, polyacrylamide, polyacrylate 20/10/05 Thévenot D.: SGE-M1-Module-Eau-3.ppt 41 3.1 Trait. chim.: technique Décanteur - floculateur raclé à entraînement périphérique – Coagulation - floculation au centre 20/10/05 Thévenot D.: SGE-M1-Module-Eau-3.ppt

4 tubes. Blotting Les techniques de blotting permettent de déterminer la présence d'une molécule de taille donnée et pouvant s'hybrider avec une sonde choisie. La première étape est une électrophorèse sur agarose ou polyacrylamide pour séparer les molécules selon leur taille. Ensuite, elles sont transférées sur une membrane en nitrocellulose par éléctrophorèse perpendiculaire au gel ou bien par effet buvard. L'étape suivante consiste à incuber la membrane

sont cultivées sur un substrat poreux dans un milieu sans sérum avec un mélange approprié de facteurs de croissance et d'adhérence. Les cellules peuvent également être cul- 5 tivées en suspension sur des microbilles en verre, plastique, polyacrylamide et molécules de dextran réticulées. Cette technique a été utilisée pour permettre aux cellules adhérentes de pousser dans des systèmes de culture en suspension et se développe de façon importante dans la fabrication de produits biologiques cellulaires

d’élution est d’autant plus grand que la masse moléculaire est faible. La colonne est calibrée à l’aide de protéines pures de masse moléculaires connues, puis les protéines à étudier sont chromatographies à leur tour. L’électrophorèse en gel de polyacrylamide avec SDS (sodiumdodécyle sulfate) est une technique dans la quelle les mobilités électro phorétiques des protéines sont rendues sensiblement égales ; dans ces condition, le déplacement, sous l’effet du champ électrique appliqué, au sein du gel