Polyacrylamide

dans un bloc chauffant pendant 3 min. Mélanger les tubes au Vortex pendant 30 s. Centrifuger pendant 1 min et transférer chaque surnageant dans un tube propre. Utiliser 10 µl (0,5 de DO600nm par puits) de la préparation pour déposer sur gel de polyacrylamide. 

cinétiques mais également par leurs pH isoélectriques, le monomère H étant le plus chargé négativement à pH neutre^ou alcalin. Cette dernière propriété est utilisée pour séparer les isoenzymes de la LDH par électrophorèse non dénaturante en gel de polyacrylamide. Au cours de cette manipulation, la purification partiellede la LDH sera effectuée par chromatographie d'affinité sur bleu Cibacron fixé par covalence sur une phase stationnaire poreuse. La structure du ligand est la suivante: 0 NH

| |- d'acides forts (H2SO4) | | |3.2. Réactivité avec l’eau |Polymérisation : formation de gels (polyacrylamides) | | |3.3. Réactivité avec le dioxygène |Stable | | |3.4. Réactivité avec d’autres composés |- Addition nucléophile

• Coloration à Gram-chromotrope Analyses moléculaires : • Isolation de l’ADN • Caractérisation d’espèce par PCR • Analyse du polymorphisme par PCR • Electrophorèse sur gel de polyacrylamide et SSCA (=single stand conformation analysis) • Séquençage ADN Résultats  L’analyse de la présence de spores microsporidennes dans les fèces de pigeons a montré que : - Les selles de 36 pigeons (29%) contiennent

enzymes d’origine intestinaleTrypsineChymotrypsineHydrolyse chimique :Bromure de cyanogène : hydrolyse de liaison peptidique du coté COOH de la MéthionineHydrolyse acide totale5.2. Détermination de la masse moléculaireElectrophorèse en gel de polyacrylamide en condit° dénaturante+ Technique de séparat° des protéines en fonct° de leur masse moléculaire à l’aide d’un gel.+ Migration des protéines sous l’influence d’un courant élec.+ protéines sont mises en présence de SDS qui dénature les protéines

d’argon de 1,72.10” N/m2. Elle est centrifugée pour éliminer un léger précipité cette opéralion est durant la concentration; formé répétée deux fois et, à ce stade la pureté de la préparation est testée par électrophorèse sur gel de polyacrylamide traité au dodécyl sulfate de sodium (SDS). MESURE DE L'ACTIVITÉ NITRO~NASIQUE IN VITRO La réaction est effectuée dans des flacons à pénicilline de 10 ml fermés hermétiquement par des bouchons à jupe rabattable en « gum souple >

sont marquées par un traceur radioactif (32P). Cette réaction se fait en général au moyen d’ATP radioactif et de polynucléotide kinase. 2. Isolement du fragment d’ADN à séquencer. Celuici est séparé au moyen d’une électrophorèse sur un gel de polyacrylamide. Le fragment d’ADN est découpé du gel et récupéré par diffusion. 3. Séparation de brins: Les deux brins de chaque fragment d’ADN sont séparés par dénaturation thermique, puis purifiés par une nouvelle électrophorèse. 4. Modifications chimiques

L’électrophorèse, une longue histoire de supports •  •  •  •  •  •  •  •  En veine liquide (Tiselius 1930) Papier filtre (membrane) Acétate de cellulose (membrane) Amidon (milieu gélifié) Agar-agar (milieu gélifié) Agarose (milieu gélifié) Polyacrylamide (gel) Capillaire de silice (veine liquide, ∅ < 100 µm, l: 8 cm) www.admed-ne.ch Rappel des principes •  Charges des protéines –  Afin d’être solubles dans un phase aqueuse, toute molécule doit pouvoir s’entourer d’une couche de molécules

pour les protéines. Rapport = 1.789 Concentration = 0.071x 50 = 3.55 μg/ml Troisième Séance : Eléctrophorèse Sur Gel • Principe : Les protéines sont séparées en fonction de leur masse molaire par électrophorèse en présence de SDS sur gel de polyacrylamide de concentration uniforme dans un système à cuves verticales. • Methodologie : La Préparation du gel D’agarose à 1% : (1g agarose/ 100ml TBE ). TBE: tampon d’éléctrophorèse(Tris-borate-EDTA) Utilisé pour la migration éléctrophorique toujours à

| Hacking | Sciences | Technology | Ti 92 | Programming | Free articles | Links | Webmaster PURIFICATION DU LYSOZYME DE BLANC D’OEUF PAR CHROMATOGRAPHIE D’ECHANGE D’IONS ET CONTROLE DE L’HOMOGENEITE DU LYSOZYME PAR ELECTROPHORESE SUR GEL DE POLYACRYLAMIDE EN PRESENCE DE SDS S K E L E T O N Ä Castry Glwadys and Delbé Lionel Ä Licence de biologie générale Université des Antilles Guyane faculté des sciences Ä Travaux pratique de biochimie assuré par Th.MARIANNE PEPIN Ä 18 janvier 2001