Autour de la caséine : préparation des caséines, détermination de sa concentration, analyse d'acides aminés constitutifs

Madison Trinquart madison.trinquart@etu.univ-amu.fr
Courprie-Bompart Justine justine.courprie-bompart@etu.univ-amu.fr

Résumé :

Le lait est composé de protéines appelé caséine. Lors de ce TP, nous nous sommes familiarisé avec des techniques classiques de biochimie en utilisant la caséine comme protéine d'étude.

Introduction :

La caséine est une protéine constituant la majeur partie des composants azotés du lait. Pour travailler sur les caséines nous devons les isolées des autres constituants grâce à la précipitation isoélectrique ou point isoélectrique (pHi) où est un pH particulier ou la protéine contient autant de charges positives que de charges négatives. Ensuite, nous avons quantifier la tyrosine (Tyr, Y), qui est un acide aminé aromatiques, polaire et donc hydrophobe. On la quantifie donc dans une préparation pour déterminer la concentration en caséines à partir de la quantité de tyrosine constitutive. Et enfin, nous avons séparés les acides aminés provenant d'hydrolysat des caséines par chromatographie de partage.

Matériel et Méthodes :

Précipitation des caséines :
Toute les protéines ont un point isoélectrique. On utilise cette propriété pour séparer les caséines. Le principe de cette technique est le suivant : abaisser le pH du lait à 4,6 qui est le pHi moyen des caséines, à ce pH les caséines vont précipiter, ensuite il faut récolter le précipité par centrifugation et le laver à l'éthanol pour éliminer les molécules d'eau et le faire sécher. 20 mL de lait écrémé a été mesuré avec une éprouvette et verser dans un bécher. 5 mL d'acide acétique ( 0,2 mol/L) on été ajouté puis laisser reposer sur la paillasse 5 min.le mélange a été centrifugé 10 min à 10°C à 4000tr/min dans un tube falcon. Le surnageant a été éliminé. Le tube a été laissé sur la paillasse afin qu'il s'égoutte. 10 mL d'éthanol 70% ont