EXERCICES D'ENZYMOLOGIEEXERCICES D’ENZYMOLOGIE Exercice n°1 :
Une enzyme catalyse la réaction : S -----> P.
Les vitesses initiales ont été déterminées pour chacune des concentrations initiales en substrat suivantes : Q1: Vérifier que la cinétique est michaelienne.
Si la cinétique est michaelienne, les données doivent vérifier la relation de Michaelis-Menten.
Q2: Si [S] = 2,5.10-5M, quelle est la vitesse initiale?
Même question pour [S] = 5.10-5M et [S] = 0,02 M.
Q3: Si [S] = 1.10-2 …afficher plus de contenu…

Question 1:
Quel est le rendement de la purification ? Aide 1 :
Il faut calculer le nombre total d'unités d' enzyme avant et après la purification et effectuer le rapport. Réponse :
Avant la purification : on a 1,6 U dans 20 microl des 50 ml soit un total de 4000 U.
Après la purification : on a 5,9 U dans 20 microl des 12 ml soit un total de 3540 U. Le rendement de purification est donc de: (3540 / 4000) x 100 = 88,5 % . Question 2:
L'activité de l' enzyme est testée sur les mêmes extraits obtenus après purification:
- étape 1 : 1,2 g de protéine sont récupérés dans 50 ml (extrait 1).
- étape 2 : 0,36 g de protéine sont récupérés dans 12 ml (extrait …afficher plus de contenu…

Vous réaliserez à partir d'une solution de S à 1M les dilutions suivantes auxquelles vous ajouterez E et incuberez 10 minutes à 37°C. Le volume final est de 1 ml. Vous prendrez ensuite la D0 410 nm.
[S] : 10-3M ; 2 x 10-3M ; 3 x 10-3M ; 5 x 10-3M ; 10-2M ; 2 x 10-2M ; 3 x 10-2M ; 10-1M ; 2 x 10-1M et 3 x 10-
1M.
Vous déterminerez graphiquement Km (en M) et Vmax (en mmoles/min) de l' enzyme pour S. On vous rappelle l'équation de Michaelis-Menten:
V = (Vmax[S]) / (Km+[S]) et e = 5000 L/mol/cm.
N'ayant plus assez de temps notre étudiant décide de résoudre son problème différemment et ne fait les mesures que pour 2 valeurs de [S] :
- D0 = 0,25 pour [S]= 5 x 10-3 M
- D0 = 0,35 pour [S] = 10-2 M
Question