Rapport scientifique:

Sous clonage du promoteur de

Gabarapl1 dans un

vecteur reporter Luciférase pGL3

Résumé

Lors de cette expérience, nous avons réalisé un clonage. De nombreuses manipulations ont été effectuées. D'abord nous avons préparé l'insert et le plasmide, que nous avons ligaturé. Les bactéries ont ensuite été rendues compétentes avant qu'elles ne soient transformées par le plasmide recombinant. Enfin ; nous avons procédé à l'analyse de notre produit de clonage.

Introduction

Le travail réalisé lors de ce TP aura pour but la réalisation d'un clonage, c'est à dire l'insertion d'un fragment d'ADN contenu dans un vecteur initial dans un autre vecteur puis la transformation de ce plasmide recombiné dans les bactéries E-Coli. La transformation consiste à introduire un plasmide par choc thermique, électroporation ... dans une bactérie afin d'obtenir des clones de bactéries recombinantes qui seront par la suite analysés. Ainsi les bactéries transformées disposeront de nouvelles protéines qui leurs seront bénéfique ou non pour leur développement. Ici, nous travaillons avec le fragment d'ADN Gabarapl1 du plasmide pJET qui est introduit dans le vecteur reporteur Luciférase. Les manipulations et techniques utilisées sont expliquées dans un premier temps puis les résultats seront exposés et discutés. Enfin nous réaliserons une conclusion sur ce travail.

Matériel et méthodes

L'ensemble des manipulations ont dû être soigneusement réalisées afin d'obtenir des résultats cohérents qui pourront être analysés et commentés par la suite. De nombreux tests ont été réalisées pendant les manipulations pour confirmer la présence de l'insert ou du vecteur à ces moments précis, notamment des électrophorèses. Nous allons donc détailler dans ce paragraphe les étapes précises de l'expérience.

PCR (polymerase chain reaction)

Pour réaliser l'amplification, le milieu réactionnel doit