I.N.S.A. de ROUEN Laboratoire de Chimie Analytique U.E. TP ANALYSE INTRODUCTION A LA HPLC : UTILISATION DU LOGICIEL HPLC SIM 2001.
PRINCIPE GENERAL DE L'HPLC. High Performance Liquid Chromatography Il s'agit ici d'une méthode de séparation puis de quantification des composés chimiques. On l'utilise en général plutôt sur les produits thermosensibles et non volatiles. On injecte les mélanges à analysé sur une colonne chromatographique constitué d'un tube en inox rempli d'une phase stationnaire. Le mélange est poussé à débit constant vers la sortie de la conne où se trouve un détecteur.

METTRE EN PLACE LE CD-ROM avant tout.
Ce logiciel permet à la fois: - de simuler les différents éléments d'une chaîne évoluée d'HPLC. - de mettre au point les conditions d'une séparation: • en mode isocratique. (Phase mobile de composition constante dans le temps ) • en mode gradient d'élution. (Phase mobile de composition variable, ici linéairement, cours du temps).

au

I. Prise en main du logiciel L'objectif de cette partie est de prendre en main le logiciel.

le dessin ci contre permet de reconnaître tous les éléments de la chaîne chromatographique.

I-1: Se constituer un échantillon

* Cliquer dans le bloc "SAMPLES"

Création d'un nouvel échantillon en cliquant : "New vials" de l'écran Samples.

* l'étiqueter par exemple "XXX1" * Y introduire les composants du mélange à séparer et leur concentration. 1

pour cela, cliquer "STANDARDS". Ajout de produit dans la solution en cliquant sur "Add Standards" de l'écran Samples.

Le premier mélange à séparer comprendra les produits 1,2, 4, 6 et 8. On prendra une concentration de 10 mg / ml pour tous les composés. Utiliser également les aides obtenues en cliquant sur "HELP"

La gestion des échantillons est disponible en cliquant sur "Sample Drawer" de l'écran Samples.

I - 2 : Choix de la Colonne.
On travaille ici en Chromatographie à polarité de phases inversées ( Reversed Phase Liquid Chromatography) , c'est à