Ninhydrine

de ninhydrine à 0,2% dans le mélange éthanol-acide acétique (4V : 1V) et en séchant ensuite le chromatogramme pendant 2 à 3 minutes dans une étuve à 80°C. Exemple de préparation de la solution de ninhydrine à 0.2%. Pour préparer 200 ml de cette solution : - on pèse 0,4g de ninhydrine (se présente sous forme de poudre) - on prépare le mélange éthanol, acide acétique en mesurant 160 ml d'éthanol et en rajoutant 40 ml d'acide acétique (mélange 4V : 1V) - on dissout les 0,4 g de ninhydrine avec

avec la Ninhydrine :     Très utilisée comme réactif révélateur des acides aminés en chromatographie. La ninhydrine est sous forme hydratée la 2,2-dihydroxyindan-1,3-dione, soit: La fonction cétone centrale est très électrophile et réagit avec la fonction amine des acides aminés L' -aminoalcool perd une mole d'eau, puis une mole de CO2, en donnant une imine, Cette imine est hydrolysée et libère un aldéhyde et une amine, L'amine libérée réagit avec une autre mole de ninhydrine pour donner

mammifères, on retrouve notamment des AA de la série L. Les AA aromatiques: F, W et Y Cela permet de doser les protéines par spectrophotométrie. Loi de Beer-Lambert: A= ε* L* c avec A= log I0/I 2- Réaction à la ninhydrine En présence d'un AA, réduction de la ninhydrine et libération d'un ammoniac NH3 et d'un CO2. Pour un amine 1aire, il y a formation d'un coloré pourpre ou rouge-orangé pour un amine 2aire. V. Rôle Biologique des AA Réaction de transamination importante pour le

conférer à ces acides aminés un certain caractère hydrophobe même si celles-ci sont hydrophiles. Il faut tout de même tenir compte des problèmes rencontrés au moment de la révélation du chromatogramme. Ayant quelque désagrément avec le spray de ninhydrine qui devait être pulvérisé sur le film, nous avons utilisé une autre technique dont les substances sont inconnues. On ne voit pas apparaître la tache représentant la glycine sur le chromatogramme, on peut faire la supposition comme quoi nous avons

H315 H336 H361f H373 H411 P210 P261 P273 P281 P301 + P310 P331 Hypobromite de sodium H315 H318 H400 P273 P280 P305 + P351 + P338 Méthanol H225 H301 H311 H331 H370 P210 P260 P280 P301 + P310 P311 α-Naphtol H302 H332 H400 P273 Ninhydrine H302 H315 H319 H335 P261 P305 + P351 + P338 KOH H302 H314 P280 P305 + P351 + P338 P310 Rouge Ponceau H315 H319 P335 P261 P305 + P351 + P338 NaOH H314 P280 P305 + P351 + P338 P310 Véronal H302 BCH2001L Biochimie Expérimentale

solution A. Prélever de la solution A et faire un dépôt sur le repère A de la plaque. Mettre à migrer. ----------------------- [pic] La révélation de la plaque permet de rendre visible les taches. Elle fait intervenir un composé très toxique la ninhydrine. Pour des raisons de sécurité, vous ne ferez pas cette manipulation mais vous pouvez en observer une réalisation sur la vidéo qui se trouve à l'emplacement désigné par l'enseignant sur votre poste de travail. Le chromatogramme obtenu est donné

actionnant la touche "RUN". L'appareil sonne losque le temps de migration programmé est écoulé A la fin de l'électrophorèse, éteindre le générateur puis retirer la feuille de papier et la faire sécher à l'étuve. Vaporiser sous la hotte la solution de ninhydrine (2 mg/ml dans l'acétone) puis remettre à l'étuve 5 minutes à 105°C pour révéler la coloration. Manipulation SOUS HOTTE - PORT DES LUNETTES OBLIGATOIRE TP de BIOCHIMIE – Licence BB L2 S4B0700 TP II Spectrophotométrie T.P. II SPECTROPHOTOMETRIE

des protéines : Le test de la ninhydrine... La ninhydrine est un composé aromatique utilisé comme révélateur des acides aminés. Lorsqu'un acide aminé en solution est chauffé avec de la ninhydrine (en excès), il conduit à un chromophore bleu/violet. C'est l'intensité de la coloration qui est à la base de la méthode quantitative de dosage d'acides aminés. La réaction s'effectue en 3 étapes : La première étape correspond à l'action d'une première molécule de ninhydrine sur l'acide aminé pour donner

R-C-COOH I NH2 Le réactif caractéristique des acides aminés est la ninhydrine. Ce composé donne une coloration bleu/noir en présence des acides aminés. B – Les Peptides Les acides aminés peuvent réagir les uns avec les autres pour donner naissance au peptides selon une réaction de type : Exemples =

techniques peuvent être utilisées, par exemple l'utilisation d'une poudre magnétique déposée à l'aide d'une baguette aimantée, technique utilisable également sur une surface non poreuse. On peut également appliquer des agents chimiques tels que la Ninhydrine ou le DFO (Diazafluorènone) réagissant aux corps chimiques présents dans la sueur. La solution est alors pulvérisée sur la surface, puis chauffée. Il ne reste plus alors qu'à prendre une photographie de l'empreinte. Suite au prélèvement de l’empreinte