Purification du lysozyme de blanc d'œuf

Compte rendu du TP n°1 BL01

Séance du : OÂ/0^ //Q

Binôme :

Note :

Observations :
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Récapitulez les objectifs de ce TP :

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I) Quel est le principe de la méthode de purification utilisée ? Dans quelles fractions doit-on s'attendre à récupérer le lysozyme ? Justifier votre réponse.

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Compte rendu du TP n°l BL01

Purification du lysozyme de blanc d'ceuf

II) Dans les autres fractions (nommez les) que doit-on s'attendre à récupérer ?

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n

-

III) Quel est le principe du dosage de l'activité enzymatique utilisé durant cette séance deTP? IV) Mesure de l'activité enzymatique :
a) Remplissez le tableau suivant avec vos mesures expérimentales pour les fractions
FO, FI, F2, El et E2. Puis calculez le nombre d'unités enzymatiques (UE) de lysozyme présentes dans les cuves de spectrophotométrie pour ces différentes fractions.

Temps

FO
A450nm

F2

FI

UE

0
15"
30"
45"

A450nm

UE

A450nm

E2

El
UE

A.450nm

UE

A450nm

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Compte rendu du TP n°l BL01

Purification du lysozyme de blanc d'œuf

b) Sur une feuille de papier millimétré, vous représenterez, en fonction du temps, le nombre d'unités enzymatiques par ml (UE/ml) dans les cuves de spectrophotométrie correspondantes aux fractions FO, FI, F2, El et E2.
» _ (j<jr •*-O<ST SV) Calculez le rendement de récupération du lysozyme.

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VI) Quel est le nombre total d'UE dans les fractions (Falcon) F0 uti ie, FI, F2,

l et E2 ?

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VII) Quel est le nombre cTUE dans F0 t otai et dans un œuf ?

VIII) Quel est le principe du dosage des protéines utilisé durant cette séance de TP ?

IX) Dosage des protéines :
a) Remplissez le tableau suivant avec vos mesures expérimentales pour la gamme étalon de BSA. Sur une feuille de papier millimétré, vous représenterez la gamme étalon du dosage protéique, à savoir Tabsorbance en