Dénaturation et hybridation

Pages: 2 (463 mots) Publié le: 22 mai 2013
Dénaturation et hybridation.

I\ Dénaturation.

On va retirer la structure secondaire ou primaire de l’ADN ou de l’ARN. On chauffe pour que les deux brins se séparent (à la température de fusionou Tm : melting). Le nombre de liaisons H-H et la composition du milieu influencent ce Tm :
- Le nombre de liaisons H-H dépend de la longueur du fragment (jusqu’à 150 liaisons). Ce nombre estimportant pour les petits fragments (50 à 60 bases).
- La composition en bases GC / AT.
- La présence de mis-appariement.

- la composition du milieu : une augmentation de sels monovalents élève le Tm.Une augmentation d’urée, de formamide permet de diminuer le Tm.
- Un pH extrême diminue le Tm.

Quand on dénature de l’ADN, on change ses propriétés.

Sa densité augmente ; en centrifugationisopycnique, l’ADN simple brin est au niveau de l’ARN.
- Les colonnes d’hydroxyapatite (phosphate de calcium) retiennent l’ADN double brin et laissent passer le simple brin.
- Les membranes de nylon oude nitrocellulose retiennent le simple brin et laissent passer le double brin.
L’hybridation dépend de la température, de la concentration et du temps.

II\ Hybridation.

A\ Hybridation en phaseliquide.


L’ADN génomique qui va être cloné est marqué radioactivement.






Cette électrophorèse permet de voir la taille des brins hybridés.

Remarque : Pour une même concentrationd’ADN, plus le génome est petit (ou peu complexe), plus la renaturation est rapide.

Dans un tube, on met 10µg/mL d’ADN, on chauffe puis on laisse refroidir.












On a unecourbe en paliers : ce sont les trois populations différentes d’ADN dans le même génome.

B\ Hybridation d’une amorce.

L’amorce est un oligonucléotides synthétisé chimiquement.



C\ Hybridationsur phase fixe (support solide).

On fabrique un oligonucléotide polyT que l’on fixe sur des billes.


D\ Fixation de l’ADN sur une membrane de nitrocellulose ou de nylon.

Remarque : ces...
Lire le document complet

Veuillez vous inscrire pour avoir accès au document.

Vous pouvez également trouver ces documents utiles

  • L'éducation est-elle une dénaturation ?
  • L'education est elle une denaturation
  • Sartre
  • Hybridation in situ
  • Hybridation via ferrata
  • Civ 15 avril 1972 dénaturation
  • L'homme face à la technique ou la dénaturation de masse

Devenez membre d'Etudier

Inscrivez-vous
c'est gratuit !