Phosphate

Pages: 16 (3966 mots) Publié le: 19 mars 2013
UNIVERSITE DE LA REUNION Faculté des Sciences et Technologies Département de Biochimie et Biologie Moléculaire
Année Universitaire 2011-2012

UE S34BC22

TP 1: L’ORTHONITROPHENOL oNP-OH

TP 2: THERMODYNAMIQUE D’UNE REACTION ASPECTS QUALITATIFS

TP 3: ETUDE CINETIQUE D’UNE ENZYME: LA PHOSPHATASE ALCALINE

L’objectif des Travaux Pratiques de biochimie est :  d’initier un jeune publicattiré par les Sciences de la Vie aux techniques les plus classiques actuellement utilisées dans les laboratoires.  de lui faire acquérir la notion de rigueur expérimentale (soin dans la réalisation des expériences, et à plus long terme dans leur conception).  d’apprendre à travailler en équipe, à gérer le facteur « temps ».  de développer l’aptitude à communiquer les résultats expérimentaux defaçon claire, précise, concise, par écrit ou oralement : figures, schémas et tableaux avec titre et légende résumant l’expérience, échelles claires et cohérentes, texte précis et concis, etc ; quelques exemples de présentation de résultats font l’objet de l’annexe 3 du présent fascicule.  de développer l’esprit critique : capacité à analyser les résultats d’une expérience, à les discuter enfonction des connaissances générales qui peuvent faire appel à des éléments relevant d’autres disciplines, comme la chimie, la physique, les mathématiques.

L’objectif des Travaux Pratiques de bioénergétique et enzymologie est :  d’utiliser la spectrophotométrie d’absorption durant les 2 manipulations de 8 heures que vous aurez à réaliser. Limitée à la région du spectre électromagnétique comportantle proche ultra-violet (200-340 nano-mètres) et le visible (340-800 nm), la spectrophotométrie d'absorption est une des techniques qui présente le plus d'intérêt pour les biochimistes parce qu’elle met en relation la mesure de l’intensité d’un signal (l’absorbance) avec la concentration d’une molécule en solution (pour cette raison, des rappels sur la notion de concentration, avec exercices, etles bases fondamentales de la spectrophotométrie, font l’objet des annexes 1 et 2, placés en fin de fascicule, et doivent être travaillés avant la première séance de TP).  d’identifier les substances inconnues grâce à leur spectre d'absorption et de déterminer la concentration de composés en solution en mesurant l'absorption à une ou plusieurs longueurs d'onde.  de suivre au cours du temps denombreuses réactions catalysées par des enzymes par la mesure spectrophotométrique de l'apparition d'un produit, de la disparition d'un substrat ou de la modification d'un coenzyme.  d’appliquer ces différents aspects de la spectrophotométrie à l’étude de la réaction d’hydrolyse d’un substrat : l’oNPG, catalysée par la  galactosidase, enzyme spécifique des galactosides.

Réglement intérieur :Les travaux pratiques sont obligatoires et commencent à l’heure prévue. Toute absence pour raison médicale doit être justifiée par un certificat médical délivré par la Médecine Préventive Universitaire. Les étudiants inscrits dans un groupe de travaux pratiques doivent suivre l’ensemble du cycle de TP dans ce groupe. Les cheveux longs seront attachés. Port de chaussures fermées obligatoire.Matériel de TP obligatoire : blouse + marqueur permanent + calculette scientifique type « collège » + papier millimétré (10-15 feuilles)

TP 1 L’ORTHONITROPHENOL oNP-OH

Objectifs :
1 – réaliser, à partir d’une solution mère d’orthonitrophénol, une série de dilutions successives de concentrations précises 2 – se familiariser avec la notion de concentration, que celle-ci soit exprimée en masse, enpourcentage (p/p ; p/v ; v/v), en équivalents acide (H+) ou basique (OH-), en molarité 3 – comprendre les termes « dilution » et « facteur de dilution » 4 - apprendre à tracer le spectre d’une substance inconnue ; distinguer « domaine ultraviolet » et « domaine visible » d’un spectre 5 – déterminer, à partir d’un spectre, la longueur d’onde d’absorbance maximale de la substance étudiée 6 –...
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