TP ENZYMOLOGIE
ETUDE CINETIQUE DE LA PHOSPHATASE ALCALINE ET DETERMINATION DU PH OPTIMUM

Introduction
Les phosphatases sont des enzymes qui hydrolysent les monoesters phosphoriques.
Ici, on étudiera les effets de l’enzyme sur le PNPP. La phosphatase alcaline hydrolyse le PNPP suivant la réaction suivante :

PNPP + H2O PNP

Cette réaction libère du PNP. Le PNPP est incolore, alors que le PNP est jaune en milieu alcalin, ce qui permet de le doser directement par spectrophotométrie à 410nm.
Au cours de ce TP, nous allons essayer de déterminer la cinétique de la réaction catalysée par l’enzyme ainsi que son pH optimum. Le ph optimum étant le pH auquel l’enzyme est la plus active.

Explication de la dilution :
Nous avions à disposition 25ml d’une solution de PNPP à 5mM. Nous avons fait une dilution en cascade de manière à ne pas jeter de solution à la fin. * Pour la première dilution, nous voulons une dilution.
Nous avons prélevés 10mL de la solution de PNPP auquel nous avons rajouté 10mL d’eau. Nous avons obtenu ainsi 20mL à une concentration de 2,5mM. * On veut une solution à 1mM. Il faut faire une dilution au .
On prend 20x = 8mL de la solution précédente, auquel on rajoute x 20 = 12mL d’eau. On obtient 20mL d’une solution à 1mM et il reste 10mL de la solution précédente. * On veut une solution à 0,5mM. Il faut faire une dilution
On prend 10mL de la solution précédente auquel on rajoute 10mL d’eau. On obtient 20mL d’une solution à 0,5mM et il reste 10mL de la solution précédente. * On veut une solution à 0,25mM. Il faut faire une dilution
On prend 10mL de la solution précédente auquel on ajoute 10mL d’eau.
On obtient 20mL d’une solution à 0,25mM et il reste 10mL de la solution précédente. * On veut une solution à 0,167mM. Il faut faire une division au.
On prend 10mL de la solution précédente auquel on ajoute 5mL d’eau.
On obtient 15mL d’une solution à 0,167mM et il reste 10mL de la solution précédente. * On veut une