TP SPECIFICITE DES ACTIONS ENZYMATIQUES: LES GLYCOSIDASES |

I – BUT

Le but de ce TP est de déterminer la structure d’un diholoside par l’action enzymatique spécifique des glycosidases et de mettre en évidence son pouvoir réducteur éventuel par le test à la liqueur de Fehling.

II – Principes

Action des glycosidases :

Les glycosidases font partie de la famille des hydrolases c'est-à-dire qu’elles catalysent la rupture de liaisons osidiques afin de libérer un ou plusieurs composés osidiques. Ces hydrolases ont la particularité d’être très spécifiques, en effet leur particularité d’action dépend (principalement): De la nature du résidu glucidique impliqué dans la liaison De la configuration D ou L de l’ose De la configuration anomérique (α ou β) Le type de liaison reliant les osyl De sa forme cyclique (pyranose ou furanose)
Il est donc possible d’identifier les sucres présents dans un polyoside en le faisant réagir avec toute une gamme d’enzymes connues. En effet si un polyoside réagit avec une enzyme spécifique à un sucre, une forme cyclique et une liaison, on peut déduire que le sucre correspondant à l’enzyme, sous la forme cyclique spécifique à cette enzyme est présent dans le polyoside et qu’il est relié aux autres sucres par le type de liaisons spécifique à l’enzyme. Car si un seul des critères de spécificité n’est pas respecté l’hydrolyse n’est pas catalysée par l’enzyme.

Mise en évidence du pouvoir réducteur à la liqueur de Fehling

Elle permet de mettre en évidence la présence de sucre réducteur en solution c'est-à-dire possédant un OH anomérique non engagé dans une liaison osidique. Initialement bleu (Cu2+), la liqueur de Fehling forme un précipité rouge brique (Cu2O) à chaud en présence de sucre réducteur. En effet, l’ion cuivre II oxyde l’aldéhyde pour donner un précipité de couleur rouge brique : oxyde de cuivre I Cu2O, selon la réaction suivante: R-CHO + 2 Cu2+(aq) + HO -( aq) RCOO - + Cu2O(s) + H2O