Tp1 : Biocatalyse en milieu organique

Syrine Chakroun
Sahar Bahri

Bio3 : Groupe 2
Année universitaire :2014/2015

Objectif :
L’objectif de ce TP est d’étudier l’action catalytique des lipases dans les réactions d’estérification et de transestérification.
I-Estérification :
1.Principe :
-Les esters apparaissent fréquemment comme composés essentiels dans des substances "odorantes" (arômes naturels ou artificiels,..).
Une estérification est une réaction équilibrée d’unalcool sur un acide carboxylique donnant un ester et de l’eau :

-Les lipases sont des enzymes capables de catalyser l'hydrolyse d'esters glycéridiques en milieu aqueux et la synthèse d'esters en milieu non-aqueux. Elles sont de ce fait capables de catalyser un grand nombre de réactions d'intérêt industriel .Ils ont également la capacité de réaliser des réactions de synthèse telles que l'estérification (réaction entre un acide et un alcool), la transestérification (ester et alcool).
2 .équations des réactions réalisées :
En vue de l’obtention de différents arômes on a réalisé deux réactions :
1/ Acide acétique +Alcool isomaylique Acétate d’isoamyle ( arôme : banane )
2/ Acide acétique +octanol Ethanoate d’octyle (arôme : Orange)
3.Protocole expérimentale :
-Acide acétique :
Masse molaire =60.05 g/mol
Densité : d=1.05

Le volume nécessaire d’acide acétique pour avoir une solution de volume 5ml et de concentration 250mM : n= n=C*V d= D’où : V acide= = =
AN :

-l’alcool isoamylique :
Masse molaire = 88.148 g/mol
Densité : d=0.81
Le volume d’alcool isomaylique pour préparer 5 ml d’un solution de 250mM

-l’octanol :
Masse molaire = 130.22 g/mol
Densité : d=0.82
Le volume d’alcool isomaylique pour préparer 5 ml d’un solution de 250mM :

La lipase ( novozyme 435) :
5700 U 1g 1000 U 0.175g
On peut analyser la présence des arômes par CCM ou par CPG

4. Principe de CPG :
Un gaz vecteur (généralement l’hélium)