Exercice 1 Trypsinisation et repiquage des cellules adhérentes en mono- couche (en démonstration)Objectif• Répliquée une culture de cellules de type TM3 (cellules de Leydig de testicule de souris) à confluence d'environ 90% • Dans un flacon de culture tissulaire de 25 cm2 (T25) contenant 5 ml de milieu de culture cellulaire • Le milieu utilisé est le DMEM/F12 contenant 5% de sérum de cheval et 2.5% de sérum de bovin …afficher plus de contenu…

Les cellules seront décollées par traitement à la trypsine, puis seront repiquées dans un nouveau flacon • Ce processus constitue un passage de cellules en culture cellulaire Matériaux• Cultures de cellules de Leydig de type TM3

• PBS sans Ca2+ et Mg2+ préchauffé à 37°C

• Solution de trypsine/EDTA préchauffée à 37°C

• Milieu complet de DMEM/F12 avec sérums de cheval à 5% (v/v) et FBS à 2.5% (v/v)

• Pipettes stériles de 5 mL

• Embouts longs de 1000 μL stériles

• Incubateur à CO2 à 37 ° C

• Flacon de 25 cm2 (T25)

• Microscope inversé à contraste de …afficher plus de contenu…

Les cellules en culture devraient présenter un état de confluence élevé, être en adhérence avec le fond du flacon et présenter une forme étalée 2) Sous la hotte à culture cellulaire, préalablement démarrée pour 10 minutes, aspirer le milieu de culture du flacon T25 contenant les cellules TM3 adhérées au fond du flacon. Transférer ce milieu utilisé par les cellules dans un flacon à déchets 3) Laver les cellules adhérentes une ou deux fois avec un petit volume (1 mL) de PBS stérile sans Ca2+ et Mg2+ préchauffé à 37°C pour éliminer tout résidu de milieu et de sérum pouvant inhiber l'action de la trypsine.