Bactéries Compétentes

fragment d’ADN précis. Pour cela il faut un fragment d’ADN de base (celui que l’on veut dupliquer), des nucléotides (dNTPs), des amorces choisies pour amplifier que la partie qui nous intéresse, une ADN polymérase (ici la Taq polymérase isolé de la bactérie thermophilus aquaticus résistante à de hautes températures) et des cofacteur de l’ADN polymérase (MgCl2…). Le mécanisme est le suivant : 5’ 3’ ATG STOP 3’ 5’ Dénaturation 30 sec à 94°C Amorce 1 Amorce 2 Hybridation des amorces 30sec

Transformation des bactéries avec l’ADN plasmide, purification et caractérisation de l’ADN plasmide Transformation des bactéries par l’ADN plasmide et purification de l’ADN plasmide Matériaux : 1 aliquot de 15µL d’ADN plasmide stérile (pGFP-actin à 12ng/µL) 200mL de milieu LB stérile à température ambiante (dans un erlenmeyer couvert de papier d’aluminium) 3 pétris gélose LB-ampicilline (50µg/mL) 1 pétri gélose LB 50mL de CaCl2 à 100mM, 4°C Solution saturée de bactéries DH5alpha préparée d’avance

Chapitre 1 : LES BACTERIES. On a deux grands groupes, les archéobactéries et les eubactéries. La classification est basée sur des caractères génotypiques, sur la filiation évolutive (techniques de séquençage, types de parois, …). Par exemple, la paroi des archéobactéries ne renferme pas d’acide muramique qui est le composant typique des peptidoglycanes. Les lipides membranaires présentent des chaînes aliphatiques ramifiées, alors que chez les eubactéries, ces mêmes chaînes

les conditions de la ligation, cette dernière se fait en présence d’enzyme de ligation pour ligaturer l’insert au vecteur, On a fait la pré-culture et la culture de DH5alpha puis nous avons préparés les bactéries compétentes et nous sommes passé a la transformation et l’étalement des bactéries, et enfin nous avons fait l’analyse visuelle des clones bactériens obtenus (une analyse moléculaire par PCR sur colonies et une analyse moléculaire par Mini-prep)

échanger le plasmide avec d’autres bactéries, ses besoins nutritifs stricts l’empêchent de se développer hors de son milieu de culture au laboratoire, Expliquer l’intérêt des particularités de la souche bactérienne choisie … La culture de départ a été ensemencée la veille et incubée une nuit à 37°C. Les bacté ries de cette culture sont en phase de division, ce qui les rend particulièrement aptes à intégrer un plasmide : elles sont qualifiées de « compétentes ». Noter l’aspect des colonies bactériennes

non conventionnel ATNC 2. Virus : virologie Herpes simplex = bouton de fièvre Parasites absolus, ils ont besoin des cellules pour se développer Génome : ADN ou ARN Enveloppés ou non Symétrie hélicoïdale ou cubique De 20 à 360nm de diamètre 3. Bactéries : bactériologie Procaryotes : pas de noyau individualisé dans les cellules, leur ADN est dans la cellule Gram + ou Gram De l'ordre de 1 à 3um de long E. Coli est gram - 4. Micromycètes : mycologie Aspergillus flavus : provoque l'aspergillose Eucaryotes

y a 60 ans • Recul spectaculaire de la mortalité infectieuse : les antibiotiques = facteur le plus important. Autres facteurs: Hygiène, Vaccin • Apparition et diffusion progressive de la résistance aux antibiotiques: problème actuel. Certaines bactéries sont résistantes à tout les antibiotiques= besoin de créer nouveuax antibiotiques. • Ralentissement de la recherche sur les ATB des groupes pharmaceutiques Problème: les groupe pharmaceutiques n'investissent plus dans la recherche sur les antibiotiques

SOMMAIRE: L’introduction: La problématique I) Résistance croissante des bactéries : Les causes : L’évolution de la résistance des bactéries : Le mode d’action des antibiotiques : II) Les type de résistance : 1-Des résistances naturelles 2-Les résistances acquises consécutives A-La mutation et adaptation : B- La mutation par Des échanges génétiques entre les bactéries : C-Mécanismes de transfert d’éléments génétiques : III) Mécanismes de la résistance :

cultive couramment les bactéries sur des milieux nutritifs solides. Il s'agit généralement d'une gelée additionnée d'éléments nutritifs qu'on dépose au fond d'un contenant plat. Sur ces milieux, chaque bactérie déposée se multiplie rapidement et forme un amas dense de bactéries identiques. Ce sont ces amas de bactéries que l'on appelle des colonies. | Colonies de bactéries sur un milieu solide. Chaque petit point est une colonie résultant de la multiplication d'une bactérie ensemencée à cet endroit

à la survie de la bactérie. Il contient une origine de réplication ainsi qu'un gène à l'origine de sa résistance aux antibiotiques ( il s'agit ici de l'ampicilline). Cette résistance va permettre par la suite, de sélectionner les bactéries contenant le plasmide transformé recombinant ( c'est-à-dire comportant l'ADN du phage lambda). Le plasmide recombiné et la bactérie dans laquelle s'effectue la réplication du plasmide sont mis en contact. Après avoir fait subir à la bactérie un choc thermique