Bêta-galactosidase

expression constitutive rapportée, nous avons élaboré un transgène bicistronique (figure 25) comportant une fusion transcriptionnelle entre la séquence génomique d’Hoxa2 (M. musculus) et celle du gène procaryote lacZ (E. coli) qui encode une β-galactosidase dont les conditions physico-chimiques d'activité optimale diffèrent sensiblement de celles de l’enzyme mammalienne. Ces différences de conditions et l’ajout d’une séquence d’adressage nucléaire (NLS) à l’enzyme bactérienne permettent un suivi aisé

levure diffèrent au niveau du nucléotide 103. Pour les allèles du gène de la globine-bêta : – la séquence de l’allèle bêta-S montre une différence avec la séquence de l’allèle bêta-A au niveau du nucléotide 20 ; – la séquence de l’allèle bêta-Th1 montre un décalage avec la séquence de l’allèle bêta-A à partir du nucléotide 20 ; – la séquence de l’allèle bêta-Th2 montre un décalage avec la séquence de l’allèle bêta-A à partir du nucléotide 28. Doc. 2 et 3 : La différence entre les deux allèles du gène

d’adhésion très marqué ((Fey et al., 2002),(Benghezal et al., 2003; Cornillon et al., 2000)). Plus récemment, une protéine membranaire impliquée dans l’adhésion de Dictyostelium a été découverte (Cornillon et al., 2006). Baptisée SibA (Similar to Integrin Beta), elle présente des séquences caractéristiques des β-intégrines et se lie à la taline. Cinq protéines de ce type ont été identifiées chez Dictyostelium, et pourraient être des homologues des β-intégrines des eucaryotes supérieurs. En revanche, aucun

LDC: Lysine Décarboxylase MAL Maltose MAN: Mannitol MAn: Mannose MEGA: Molecular Evolutionary Genetics Analysis MEL Mélibiose MH: Muller Hinton NJ: Neighbor- Joining ODC: Ornithine- décarboxylase ONPG: Ortho- Nitro- Phényl- beta- Galactosidase OTU: Operational Taxonomic Unite RAF: Raffinose RHA: Rhamnose RIB: Ribose RM: Rouge de Methyle SAC: Saccharose SAL: Salicine SOR: Sorbitol TRE: Trehalose TSI: Tri Sugar Iron TSAYE : Tryptone Soya Yeast Extract Agar UFT:

CYS d D Da DAO EDTA E E2 EGF F FCS Fig . aipha alanine acide aminé acide désoxyribonucléique ADN complémentaire adénosine cyclique monophosphate analyse de variance arginine messager de l'acide ribonucléique asparagine adénosine triphosphate beta bovine semm albumin bases pair cystéine calcium catalase catalase du fluide de l'oviducte centimètre conditioned media dioxyde de carbone counts per minute cystéine day acide aspartique dalton dérivés actifs de l'oxygène ethylenediaminetetraacetic

Electrophorèse sur acétate de cellulose II- LA STRUCTURE PRIMAIRE DES PROTEINES 1°) La liaison peptidique 2°) Le plan peptidique 3°) Diversité de séquences des protéines III- LA STRUCTURE SECONDAIRE DES PROTEINES 1°) L'hélice alpha 2°) Le brin béta 3°) Autres éléments de structure secondaire IV- LA STRUCTURE TERTIAIRE DES PROTEINES 1°) Motifs, supermotifs et domaines 2°) Stabilisation des structures tertiaires des protéines 3°) Formes des protéines et mécanismes de repliement V- LA STRUCTURE

enzyme essentielle entraîne la constitution de molécules précurseurs dans des structures de la cellule connues sous le nom de lysosomes. Cela provoque une maladie dégénérative du cerveau et de la moelle épinière due à une carence en bêta-galactosidase (GM-1) ou en bêta-hexosaminidase (GM-2). Un tremblement de la tête et des membres postérieurs commence à l’âge de 2 à 3 mois et devient de plus en plus sévère. À l’âge adulte, il se produit des crises convulsives et une perte de vision. La GM-1 apparaît

20 mM MOPS pH 7 was loaded on a Sephacryl 500 (GE Healthcare) size exclusion chromatography column equilibrated in [10 mM Hepes pH 7,4 - 150 mM NaCl] and calibrated with monomeric soluble proteins (BSA (67 kDa), glucose oxydase (160 kDa) and beta-galactosidase (500 kDa). The column was run with a flow rate of 1 ml/min and absorbance of the eluted fractions was read at 280 nm. Prediction of proteins secondary structure. The secondary structure of the recombinant proteins was predicted using the GOR

gène codant pour chacune d’entre elles dans deux vecteurs plasmidiques différents (figure 1). Dans les deux cas, le gène d’intérêt est placé sous le contrôle du promoteur de l’opéron lactose. Il est également associé à une partie du gène de la b galactosidase et au codon de la méthionine. Par ailleurs, le plasmide contient un gène de résistance à l’ampicilline. Les vecteurs recombinants sont introduits par transformation dans des lots différents d’Escherichia coli. Ces dernières sont mises en culture

réactifs spécialement préparés libèrent sous l’action d’un enzyme spécifique des intermédiaires instables dont la décomposition est accompagnée d’une émission de lumière. On peut ainsi quantifier avec précision les phosphatases alcalines ou la beta-galactosidase. QUELQUES SITES SUR INTERNET www.moleculardevices.com www.thermo.com www.varianinc.com www.biotek.com www.perkinelmer.com www.tecan.com www.omnilab.ch EXERCICES Solutions en fin d’ouvrage Exercice 11.1 Le fer ferreux catalyse l’oxydation