Bêta-galactosidase

Fiche réponse Titre : Variabilité génétique bactérienne et résistance aux antibiotiques Intro : Les antibiotiques sont depuis longtemps utilisés pour combattre les bactéries. Nous nous sommes aperçu, au cours du temps, que les bactéries développent une résistance aux antibiotiques, les rendant moins efficace, d’où la campagne : « les antibiotiques, c’est pas automatique !! ». Pour cette raison, et afin de donner le meilleur traitement aux malades, les médecins conseillent de plus en plus

  Cibles   Spectre   Résistance   naturelle  des   entérobactéries   Ampicilline   Bêta-­‐lactamines   A   Paroi   bactérienne   (transpeptidase)   -­‐  Bacilles  Gram+   -­‐  Certains  bacilles   gram  -­‐     -­‐  Syphilis   (treponema)   -­‐  Bacilles  gram  +   -­‐  Staphylocoques   méti-­‐S   -­‐  streptocoques   Beta-­‐hémolytiques   Pseudomonas Aeruginosa   -­‐  Bacilles  Gram  –   -­‐  Cocci  Gram-­‐

| |Beta-D-glucosidase |D |Beta |Attaque beta-glucosides et libère la bêta-D-glucose d’un diholoside | |Alpha-D-glucosidase |D |Alpha |Catalyse l’hydrolyse  de la liaison 1,4 alpha glucosidique avec | | | | |libération d'alpha-glucose | |Beta-D-galactosidase |D |Beta |Catalyse

dans le milieu, sinon la bactérie est mobilité -. Caractérisation d’enzymes : Recherche de l’O.N.P.G. Hydrolase : Test de l’O.N.P.G. : Etudier l’existence d’une Béta-Galactosidase chez le germe, donc la possibilité de la fermentation effective du lactose indépendamment de la perméase bactérienne.  Principe : La Béta-Galactosidase hydrolyse le lactose en Glucose + Galactose. En plus, elle présente 2 caractéristiques : - Elle est intracellulaire et ne peut agir sur le lactose que s’il pénètre à

autonome et non essentiel a la survie de la cellule. On les rencontre quasi exclusivement dans les bactéries. Il contient des origines de réplication, un gène de résistance à l’ampicilline, un site multiple de coupure et le gène Lac-Z qui code la Beta-galactosidase. La digestion consiste à couper les liaisons phosphodiesters entre les bases à partir d’une enzyme de restriction. Cette enzyme est endonucléase, une protéine qui coupe à des sites spécifiques, sous forme de palindrome appelés sites de restriction

l’ADN ADN pol DELTA Polymérase 5’ -> 3’ Exonucléasique 3’ -> 5’ ADN pol III Polymérase 5’ -> 3’ Activité exonucléase 3’ -> 5’ Destruction des amorces RNAse H ou FLAP endonucléase ADN pol EPSILON même rôle que la DELTA ADN pol BETA Répare les erreurs ADN pol I Synthèse 5’ -> 3’ Activité exonucléase 5’ -> 3’ Peut don détruire les amorces Ligation (ATP dépendant) ADN ligase Rattache le 5’phosphate au 3’ OH ADN ligase Les ADN polymérases extraites de bactéries

souche bactérienne, le gène lacZ, responsable de la synthèse de la bêta-galactosidase a été placé sous le contrôle du promoteur sfiA. Ainsi, lorsque l’ADN bactérien est endommagé par un génotoxique, le système de réparation SOS est activé, ce qui conduit à l’induction du gène lacZ et à la synthèse de l’enzyme beta-gal dont l’activité est quantifiée par dosage colorimétrique (apparition d’une couleur jaune) à 405 nm. L’activité de la bêta-gal est comparée à l’activité de la phosphatasealcaline (PAL) mesurée

D-Gal Dépôt 3 – D-Fru Dépôt 4 – Tube 1 : Diholoside + Tampon pH 4,8 (témoin négatif) Dépôt 5 – Tube 2 : Diholoside + Tampon pH 4,8 + bêta-D-Fructosidase Dépôt 6 – Tube 3 : Diholoside + Tampon pH 4,8 + bêta-D-Glucosidase Dépôt 7 – Tube 4 : Diholoside + Tampon pH 6,4 + alpha-D-Glucosidase Dépôt 8- Tube 5 : Diholoside + tampon pH 7,2 + bêta-D-Galactosidase Dépôt 9 – Mélange D-Glc + D-Gal + D-Fru Dépôt | glucose | galactose | fructose | 1 | 2 | 3 | 4 | 5

Aéro-Anaérobies Facultatifs - oxydase – - nitrate réductase + - fermentative du glucose - lactose -, - H2S + (ou -) - uréase – - lysine décarboxylase + - utilisant la voie des acides mixtes R.M + - indole – - ne possédant pas la béta-galactosidase Genre : Shigella - uréase – - Lactose – - désaminase – - lysine décarboxylase – - H2S – - Acétoïne – - Citrate – (comme seule source de carbone sur milieu citrate de Simmons ) - immobiles. Genre : Klebsiella Enterobacter

C’est un milieu d’isolement enrichi sur lequel les Streptocoques se développent bien. Il permet, la lecture du caractère hémolytique. C’est un milieu riche d’autant plus par la présence de sang. Caractères recherchés d’Hémolyse : - Hémolyse béta : zone claire d’hémolyse totale de diamètre 3-4 mm  entourant les colonies. - Hémolyse alpha : zone floue et granuleuse, verdâtre de 1 à 2 mm de diamètre. La gélose au chocolat : Elle n'a rien à voir avec le chocolat. Sa couleur