Centrifugation

a pour but de maintenir les constantes des conditions physiologiques. Composition du sang Le sang est un tissu liquide : il est constitué de cellules appelées les éléments figurés qui baignent dans une matrice liquide appelé le plasma. Après centrifugation : les éléments figurés du sang vont en bas. C’est principalement constitué de globules rouges (hématies/érythrocytes). Cela représente 45% : c’est l’hématocrite. Au milieu on a une fine couche blanche : les leucocytes (globules blancs) et plaquettes

Le prétraitement des échantillons biologiques : Les prélèvements sanguins subissent une centrifugation dans le but de séparer : • Le sérum (tubes secs): Il faut respecter le temps de rétraction du caillot à savoir 30 minutes à température ambiante. Cela permet d’éviter la post-coagulation. Ensuite, après avoir décollé le caillot formé, nous procédons à une centrifugation à 1500tours/mn pendant 15minutes. Nous transférons le surnageant dans un tube Eppendorf identifié d’une

milieu avec du 14N. On regarde l’évolution du 15N et 14N par centrifugation au cours des générations. Réplication semi-conservative : les 2 brins mères se séparent et chacun subit séparément une réplication (en utilisant le 14N du milieu ici). On obtient ainsi 2 nouvelles paires de brins d’acides nucléiques filles à partir d’une seule paire mère. • Génération 0 : les acides nucléiques sont constitués uniquement de 15N => lourd (cf centrifugation) • Génération 1 : le milieu contient du 14N => la réplication

éléments composants la cellule pour mettre en évidence les réactions d’oxydo-réduction du métabolisme respiratoire et d’étudier l’activité « succinate-cytochrome c réductase ». Cet isolement se fera par fractionnement cellulaire et par plusieurs centrifugations car le poids varie d’un élément cellulaire à un autre.

pressée à l'aide de poids. On obtient un jus composé d'eau et d'huile. La décantation : la densité de l'huile (0,92) étant plus faible que celle de l'eau, l'huile remonte naturellement à la surface et peut être récupérée. Cependant des procédés de centrifugation sont couramment utilisés de nos jours. Le stockage : l'huile est ensuite conservée dans des cuves en inox pour éviter l'oxydation de l'huile. Le rendement varie de 4 à 6 kg d'olives pour 1 litre d'huile. Les différentes utilisations en cuisine :

dosage du potassium Identifier Patient 4 B. Sérum, plasma, sang total ? Sérum prélèvement sur tube sec laisse coagulation se dérouler après centrifugation • surnageant = sérum absence facteurs coagulation (fibrinogène) • sous gel = caillot de fibrine + éléments figurés (GR/GB/Pl) Plasma prélèvement sur anticoagulant après centrifugation • surnageant = Plasma • sous gel = éléments figurés Sang total 5 C. Choix des tubes en fonction des paramètres à doser Ordre de prélèvement des

minutes) et qui permet ainsi de fractionner les constituants de l’homogénat : on obtient un culot et un surnageant pour une vitesse de centrifugation donné. On recueille le culot pour analyser les organites qui contient et on repasse le surnageant qui contient a une vitesse supérieur on recommence le protocole en augmentant chaque fois la vitesse de centrifugation jusqu’à obtenir le cytosol pour obtenir les organites les plus petits (ribosomes). Protocole du fractionnement cellulaire * La

optique : rouge neutre pour les vacuoles, violet dahlia ou cristal pour le noyau... [modifier] Étude des constituants cellulaires Isolement de structures : par choc osmotique, ou grâce à des détergents puis par centrifugation. Purification de protéines : par électrophorèse, centrifugation, chromatographie, dialyse.... [modifier] Numération des cellules Il est fréquent de devoir compter le nombre de cellules vivantes dans une boîte de culture et de le comparer au nombre de cellules total, par exemple

gras, biosynthèse et catabolisme des acides aminés. Techniques d’analyses biologiques et biochimiques [25H C+10H TD+8H TP / 25H C+10H TD+8H TP] Méthodes d’analyses biochimiques : La métrologie, Les techniques de filtration, Les techniques de centrifugation L’électrophorèse l'immunoélectrophorèse, les techniques chromatographiques, les techniques enzymatiques, Spectrophotométrie Méthodes d’analyses biologiques: Analyses microbiologique, Utilisation des galeries API, Analyse par PCR, Analyse par RLFP

recombinant afin de déterminer le « sens » d’intégration de l’ADNc dans celui-ci et de déterminer quel ARN polymérase (T7 ou SP6) utiliser pour synthétiser la sonde ARN. Pour cette expérience il faut séparer les bactéries du milieu de culture par centrifugation afin d’avoir uniquement les bactéries. Puis, plusieurs étapes sont nécessaires pour récupérer uniquement l’ADN plasmidique de ces bactéries car il faut déjà séparer l’ADN génomique, les ARNs, protéines…de l’ADN plasmidique. Ces étapes comprennent