EDTA

fonction de la masse de - non sélectif, universel - destructif soluté 2. Aspects analytiques 2.3 Mode opératoire Personne suspectée est amenée dans un service médical approprié 2 échantillons de sang sont prélevés et traités avec des anticoagulants (EDTA + fluorure) Injection de sang + étalon en quantités connues Obtention des résultats sous forme de chromatogramme 2. Aspects analytiques 2.4 Résultats Exemple de chromatogramme: 2. Aspects analytiques 2.4 Résultats Analyse des résultats: - Aire

pendant 15minutes à 4°C. Nous avons ensuite éliminé le surnageant et le culot a été repris dans 500µl d’éthanol à 70%. Le tube a été centrifugé pendant 5 minutes. La centrifugation terminée nous avons éliminé le surnageant et prélevé 50µl de tampon Tris-EDTA additionné de RNase A 0,5 µg/ml. L’extraction plasmidique par mini-préparation terminée nous sommes passées à l’analyse par restriction des plasmides recombinants. Pour cela nous avons fait la digestion de chaque plasmide avec les enzymes SacI et

Sommaire I- Introduction II- Objectif III- Matériel biologique IV- Description des étapes de la manipulation 1- Dissection 2- Pesage des organes 3- Broyage a- Définition b- Préparation α)- Tris HCL β)- EDTA γ)- β mercaptéthanol 4- Centrifugation 5- Congélation 6- Gamme Etalon a- Définition b- Principe α)-BSA β)-échantillon à étudier γ)-réactif de Bradford 7- Électrophorèse

dans de la glace. I-Précipitation au BaCl2 : : Il s'agit de la première étape de purification de la prothrombine à partir du plasma équin. 1 mL de plasma equin BaCl2 1M (toxique !) Solution saline « SS » : 9% NaCl et 0,2 M de trisodium citrate EDTA 0,2M pH 7,4 froid a-Activité de départ : – Prélevez un aliquote de plasma (tube « pl ») 50 µ L, pour mesurer l'activité de la thrombine ultérieurement (conservé dans la glace) : cf. partie Id pour la préparation de l'échantillon puis l''annexe

|50 |0.1 | |Tris-HCl pH 8 |1 |25 |0.125 | |EDTA pH8 |0.5 |10 |0.1 | |Eau distillée stérile | | |4.675

Orosomucoïde, Transferine, Ferritine, IgG, IgA, IgM, Récepteur soluble de la transferrine, Albumine, GOT, GPT, Phosphatases Alcalines, Lipase, GGT, CPK et MB, Aldolase + Glycémie et Ionogram prélevés au laboratoire. 14 On a également les tubes EDTA qui ont majoritairement un bouchon vert ou violet où il n'y a pas d'anticoagulant ce qui fait que le sang reste total. On y étudie : L'NFS, le groupage sanguin, la vitesse de sédimentation et réticulocytes. Enfin on a le tubes citratés qui ont

volume de sang total connu. La détermination se fait en séparant les hématies du plasma par centrifugation du sang dans des conditions standardisées de durée et de vitesse. Matériel -Prélèvement sanguin : sang capillaire ou sang veineux prélevé sur EDTA -Tube hématocrite : tube capillaire de 75 mm de long et de 1mm de diamètre ouvert aux deux extrémités -Centrifugeuse : présente un plateau spécial et peut tourner à 10 000 tours/min Technique -Plonger une extrémité du tube dans le sang veineux homogénéisé

En effet ces organites sont à l’origine de la photosynthèse, mécanisme énergétique qui fausserait nos résultats. Après les avoir coupé en petits cubes, on les place dans un mixeur en présence d’un tampon de broyage composé de Tris-HCL, saccharose, EDTA, BSA et Cystéine. Le Tris-HCL nous permet de tamponner le milieu afin de ne pas avoir de variation de pH. Le saccharose va quant à lui créer un choc osmotique, c’est-à-dire un échange d’eau avec les cellules. La concentration dans la cellule étant

prélèvements jugulaires sont considérés comme satisfaisants notamment dans un contexte de suivi itératif (Wiese, 1997). Les supports de prélèvement classiquement recommandés sont les tubes contenant de l’héparinate de lithium. Les tubes citratés et EDTA seraient à l’origine d’une perturbation des analyses (Maguire, 1972 ; Toffaletti, 1992 ; Wiener, 1995 ; Toffaletti, 1996 ; Weise, 1997). Le citrate de sodium chélate les ions lactates qui ne peuvent plus être détectés par les analyseurs. Lors de mesure

éosinophiles 7,4 % soit 0,44 Giga/L 0,05 - 0,63 0,35 Poly. basophiles 0,5 % soit 0,03 Giga/L 0,00 - 0,10 0,03 Lymphocytes 35,6 % soit 2,10 Giga/L 1,24 - 3,92 1,82 Monocytes 12,1 % soit 0,71 Giga/L 0,23 - 0,77 0,58 PLAQUETTES 236 Giga/L 161 - 398 257 EDTA Impédance - Cytométrie en flux DxH 600 Beckman (SA) Dr Philippe HIVES Biologiste Ce document ne doit pas être reproduit, sinon en entier, sans autorisation écrite du laboratoire Page 1 / 4 Cerballiance Hauts-de-France - 3 Rue du pont Hennuyer - 59220