Électrophorèse

l’ADN (TP n°2 - Activité 1)  La découverte des enzymes de restriction a constitué une avancée technologique majeure dans la mesure où elle a rendu possible la manipulation du génome. Les différents fragments d’ADN séparés peuvent être révélés par électrophorèse 2-Le clonage de l’ADN Exploitation des documents page 78 On cherche à montrer comment les manipulations du génome ont permis d’amplifier l’ADN  Explication du protocole de transgénèse : utilisation et sélection de bactéries avec plasmides recombinants

concentrer la bactérie et diluer les composants alimentaires. En effet, de nombreux composants alimentaires inhibent la Taq polymérase. Les étapes de préparation de l’échantillon, l’amplification génique elle-même, la détection des amplicons par électrophorèse en gel d’agarose prennent au moins un jour. Ainsi, la méthode nécessite en moyenne deux, trois jours pour sa réalisation, ce qui limite considérablement l’avantage lié à la très haute sensibilité de la PCR. D’autre part, la détection des amplicons

monoclonales ou anticorps spécifiques de la cellule anormale à l’origine du myélome. Une immunofixation précise par la suite le type d’immunoglobuline pathologique. En cas d’absence de pic monoclonal lors de l’électrophorèse des protéines sériques, une électrophorèse des protéines est pratiquée dans les urines du patient à la recherche de l’élimination urinaire d’une protéine de Bence-Jones. En effet, parfois, les plasmocytes anormaux synthétisent seulement un fragment d’anticorps composé de chaînes légères

environnementaux, au moyen d’un instrument de spectrométrie de masse en plasma induit par haute fréquence (ICP-MS), combiné à une préparation d’échantillons par digestion acide assistée par micro-ondes et une unité d’analyse par chromatographie liquide - électrophorèse capillaire spectrométrie de masse (LC/CE-MS). 16 -Les laboratoires de la Division de la recherche sur la qualité de l'air d’Environnement du Canada à Ottawa utilisent un instrument de chromatographie en phase gazeuse à haute résolution/spectrométrie

rouge, blanc et plaquette). A peu près 55% du sang. 90% du plasma correspond à de l’eau dans les 10% restant on trouve de nombreux solutés c'est-à-dire des ions et des molécules solubilisés. * Protéines plasmatiques : Si l’on effectue une électrophorèse des protéines de plasma. On distingue 4groupes de protéines majeures : 1er type : l’albumine  constitue à elle seul 60% des protéines du plasma. Joue un rôle fondamental dans les régulations de transfert de liquide entre le sang et d’autres compartiments

tissu, organe, cellule à étudier: on parle d'hydrolyse (ajout d'un tampon + broyage) - Détecter s'il y a des protéines, on ajout un réactif spécifique tel que le réactif de "Biuret" ou "folin-lowry". - Séparer les protéines: chromatographie ou électrophorèse. 2) Détermination de la composition en acide aminé. C'est à dire comment passé d'un peptide ou d'une protéine à la somme d'Acides aminés. a) Hydrolyse totale des liaisons peptidiques. (i) Hydrolyse chimique  Hydrolyse acide : On veut

plusieurs méthodes : * PL L L PL L PL L L L L L L P P P L L L L L L L L L L L Par leur taille (dialyse, filtration) : Membrane semi-perméable * La charge (électrophorèse ; chromatographie d’échange d’ions) * L’affinité (vis-à-vis d’autres molécules) Interaction Ligand-Protéine : On considère le cas d’une protéine avec un seul site de fixation du ligand. On part de la réaction suivante : P + L ↔ PL

les électrodes en platine fixées aux bouts des tubes capillaires. Si l'on injecte un échantillon dans ce Micro-TAS, le mélange est d'abord dilué dans le support liquide, le cas échéant dérivé, et finalement conduit dans les tubes capillaires électrophorèses. Les énergies d'électrophorèse et d'électro-osmose, qui agissent dans le système, conduisent rapidement les différentes substances du mélange vers le détecteur, à travers les tubes capillaires, ce qui provoque une séparation. Le décèlement des

effets hydrophobes par rapport aux liaisons hydrogène lors de cette phase n'est en revanche pas bien connue [18]. 3. Résultats expérimentaux Dans une étude datant de 1963, Brown et Wright, utilisant la migration des protéines en électrophorèse, suggéraient que les protéines du lait étaient susceptibles d’interagir avec les polyphénols du thé. Les tanins du thé noir, notamment, interagiraient avec les caséines et les lactoglobulines, l’α-lactalbumine ne pouvant interagir avec les polyphénols

pour prélever et analyser leur cerveau. A ce jour la Commission européenne a validé trois tests de dépistage de la forme pathogène du prion (PrPres). * Le test de la société suisse Prionics est basé sur une technique de séparation par électrophorèse, suivie d'une immunodétection (Western-blot). * Le test de la société irlandaise Enfer-Technology-Limited utilise l'immunodétection par la technique ELISA. * Enfin le test français , mis au point par Jean Philippe Deslys et collaborateurs