Fluorescence

tels que l’hippocampe ou le thalamus, il peut être préférable de substituer le saccharose au sodium (220 mM) lors de la coupe, puis de transférer les tranches ainsi obtenues dans du LCA standard. III. TECHNIQUES SPECTROFLUORIMETRIQUES La fluorescence est un type de luminescence (émission de photons) qui résulte de l’absorption de photons incidents par une molécule. L’absorption d’énergie par la molécule n’intervient que lorsque l’énergie des photons incidents correspond exactement à l’énergie

vecteur (flux) jusqu’à une source d’excitation lumineuse. Mesurer simultanément plusieurs paramètres sur plusieurs milliers de cellules par seconde Combinaison de système fluidique, optique, informatique et électronique  moyen utilisé : fluorescence  quantifier et analyser des particules en suspension  Rapidité, spécificité, reproductibilité, beaucoup informations sur même échantillon Les composants d’un cytomètre Combinaison de systèmes différents : Fluidique :

Marquage et suivi des acides nucléiques Marquages froids : fluorescence ; colorimétrie ; chimioluminescence Fluorescence Absorption d'énergie lumineuse par une molécule (fluorochrome) Passage à l'état de Molécule excitée Relaxation partielle avec perte de chaleur par échange avec le milieu ambiant Retour à l'état fondamental par émission lumineuse ( de plus grande longueur d'onde que l'onde de stimulation) = spectre de fluorescence Colorimétrie Colorants : biotine, digoxygénine

distinction se réalise par l'étude du délai du retour à l'état fondamental des molécules, après excitation. C'est le cas entre la fluorescence et la phosphorescence, phénomènes physiques pouvant être réalisé par une excitation chimique ou par radiation. Ce sont deux spécimens de luminescence distincts, et qui pourtant ont le même mode d'excitation. Cependant, la fluorescence a un temps de retour à l'état fondamental instantané, contrairement à la phosphorescence qui a un retour laborieux de ses molécules

Cellulaire 3. Microscope à fluorescence Utilisé pour détecter des molécules fluorescentes qui absorbent la lumière a une certaine longueur d'onde et émettent à une longueur d'onde plus élevée. Des filtres vont permettre d'observer des molécules luminescente sur fond noir. Il faut donc un microscope qui soit doté de 2 filtres: • le premier qui ne laisse passer que la longueur d'onde d'absorption • le deuxième qui ne laisse que la longueur d'onde d'émission. La fluorescence peut-etre: • Naturelle, émise

lampes basiques, les lampes à incandescence classiques car elles sont la représentation que nous nous faisons d’une lampe.  [pic] Tout d’abord, il existe 3 familles de lampes : les lampes à incandescence (à filament); les lampes à décharges ( fluorescence) et la DEL (electroluminescence). Point historique : La lampe, inventée par Thomas Edison en 1879 a été un sujet qui a laissé sceptique bon nombre de scientifiques. C’est une lampe “incombustible” capable de fonctionner de longs mois sans se détériorer

lumière peut a son tour éclairé. Intermédiaire doit être en mesure de réfléchir. Exemples: la lune, de l’eau, un morceau de metal C) Les phénomènes lumineux Nom du phénomène exemples Incandescence flamme, bougie, ampoule, etc Fluorescence Écran d’un téléviseur Phosphorescence Cadran d’une montre Réflexion miroir, eau Dispersion Arc en ciel Diffusion déviation de la lumière D) Le spectre électromagnétique • La longueur, ou la fréquence, de l’onde détermine

plutôt l’autoradiographie en cas de sondes radioactives, microscopie à fluorescence en cas de FISH, avidine ou streptavidine pour la biotine, anticorps marqués par un enzyme pour la digoxigénine. 3)Marquage On utilisera plutôt : -des isotopes radioactifs comme le tritium H3, P32 ou S35 qu’on peut révéler par autoradiographie - Les sondes peuvent aussi être marquées par des produits fluorescents et détecté par fluorescence (méthode de FISH = hybridation fluorescente in situ) - Un autre marquage

pour la problématique est que la production de la bioluminescence résulte d'une réaction chimique qui est par la suite utilisée dans de nombreux domaines aussi bien animaliers qu' humains. Dans un autre temps nous pourrions nous interréser à la fluorescence.

second lieu, la distinction se réalise par l'étude du délai du retour à l'état fondamental des molécules, c'est le cas entre la fluorescence et la phosphorescence, phénomènes physiques pouvant être réalisé par une excitation chimique ou par radiation. Ce sont deux spécimens de luminescence distincts, et qui pourtant ont le même mode d'excitation. Cependant, la fluorescence a un temps de retour à l'état fondamental instantané, contrairement à la phosphorescence qui a un retour laborieux de ses molécules