Séquençage de l'ADN

Explication de la méthode de Sanger    La  méthode  de  Sanger  est  un  procédé  utilisé  pour  le  séquençage  de  l’ADN,  c’est­à­dire  déterminer  l’ordre  d’enchaînement  des  nucléotides  (A­T­C­G)  dans   un  fragment  d’ADN particulier.   Pour  ce   faire,  quatre  microtubes  sont  nécessaires.  Chacun  contient  un  fragment  de  l’ADN  a  séquencer,  une  amorce, un ADN polymérase (enzyme)  et des désoxyribonucléotides  (dATP,  dCTP,  dTTP  et  dGTP).  De  plus,  les  tubes  contiennent 

utilisées IGM L'ADN ligase Ligature d'une brêche IGM L'ADN ligase Ligature de deux fragments ayant des extrémités franches IGM L'ADN ligase Ligature de deux fragments ayant des extrémités cohésives IGM La phosphatase alcaline IGM La polynucléotide kinase IGM Electrophorèse des acides nucléiques - + IGM Le séquençage de l'ADN Séquençage par incorporation de didésoxynucléotides Séquençage par terminaison de chaines Séquençage selon la méthode

génomiques obtenues à partir de l'ensemble de l'ADN extrait des noyaux, contenant l'ensemble du génome de l'espèce. Les banques d'ADN complémentaires contenant des séquences spécifiques d'ADN. Mais le clonage peut également être utilisé pour le séquençage de l'ADN : il s'agit d'une méthode consistant à déterminer l'ordre d'enchainement des nucléotides d'un fragment d'ADN. Le clonage consiste tout d'abord à introduire l'ADN à cloner (ici il s'agit de l'ADN du phage lambda) dans un vecteur (dans ce

procès, le 17 septembre 1998. Retour sur l'affaire Rey-Maupin : les tueurs de la Nation Photo du suspect des tirs à "Libération" et à la Défense, diffusée mardi 19 novembre par la police. Traque du tireur : la vidéosurveillance à l'épreuve 17 L'ADN confirme l'hypothèse d'un tireur unique à Paris et à la Défense Après les tirs et le choc à "Libération", "on continue" 11 Le récit d'une traque dans les rues de Paris L'équipe de France célèbre sa victoire avec le public du Stade de France, mardi

vase, cela ne nous expliquera jamais pourquoi il a été façonner. Pour le savoir, c'est au potier qu'il faut le demander. Francis Collins, biologiste moléculaire, a écrit ce qui suit : "La religion ne me semble pas être l'outil adéquat pour le séquençage du génome humain, pas plus que la science ne me semble être le moyen de comprendre le surnaturel. Mais pour ce qui est des grandes questions véritablement intéressantes, comme : 'Pourquoi sommes-nous ici ?' ou 'Pourquoi les humains ont-ils des aspirations

 — LES TECHNOLOGIES DE LABORATOIRE - N°5 Juillet-Août 2007 Article de synthèse Évolution des techniques de séquençage EL FAHIME Elmostafa1 and Ennaji Mly Mustapha2 1* Unités d’Appui Technique à la Recherche Scientifique UATRS, Plateforme Biologie moléculaire et Génomique Fonctionelle, CNRST, RABAT elfahime@cnrst.ma 2* Laboratoire de Virologie, Hygiène et Microbiologie, FST Mohammadia, Université Hassan II - Mohammadia. Résumé: La biologie analytique a connu depuis quelques années une grande

Séquençage Intro – 1953 La structure en double hélice de l’ADN est établie par James D. Watson and Francis Crick – 1958 L’expérience de Meselson-Stahl démontre que l’ADN est répliqué de façon semi-conservative - 1977 Séquençage d'ADN (W Gilbert, F Sanger) - 1986 Première publication publique sur la PCR par Kary Mullis (prix Nobel de chimie en 1993) - 1984 Séquence du virus d'Epstein-Barr, 170 kb - 1987 Séquenceurs automatiques (L Hood) - 1995 Séquence complète de Haemophilus influenzae

Chapitre 04 : l’histoire humaine lue dans son génome I/ Des techniques au profit de la connaissance des génomes actuels et passés (unité01)Le séquençage du génome humain, c’est-à-dire la détermination de la totalité de la séquence de nucléotides du génome humain (soit 3,4 milliards de pdb), a été réalisé entre 1990 et 2003. Il a permis de déterminer les 25000 gènes humains (selon les dernières données) et leur localisation sur les chromosomes. Ce travail a aussi permis de révéler qu’une partie importante

Séquençage PROTOCOLE INITIAL 4 mélanges sont préparés: - le fragment qui doit être séquencé - un petit morceau d'ADN dont la séquence est complémentaire à l'extrémité 3' du fragment à séquencer = amorce - les 4 dNTP's (dCTP, dATP, dGTP, dTTP) - l'ADN polymérase (vecteur) PRINCIPE : Technique de Sanger Pour le séquençage des nucléotides légèrement différents sont utilisés: les didésoxyribonucléotides (ddNTP) au lieu des désoxyribonucléotides triphosphate (dNTP). PROTOCOLE INITIAL

l’extraction de l’ADN et son amplification (PCR) ainsi que ceux de la bio-informatique ont permis le séquençage des 3 milliards de paires de nucléotides réparties sur les 46 chromosomes du génome humain. L’étude des génomes humains a révélé que 1,5% du génome code les 20 000 gènes (portions codantes de l’ADN) environ qui ont été identifiés et que plus de 50% de l’ADN n’a pas actuellement de fonction connue. Les séquençages montrent