Séquençage de l'ADN

L’INDUSTRIE DES SÉQUENCEURS D’HIER ET D’AUJOURD’HUI La recherche a connu depuis quelques années une grande révolution en conséquence des progrès technologiques de la biologie moléculaire appliquée au séquençage des génomes. En effet, connaître l’enchaînement complet des bases nucléotidiques qui constituent un génome, c’est connaître toute l’information nécessaire à la vie (du moins en théorie). Ce n’est que récemment, avec la mise en place des Programmes Génome, que de nombreux génomes, dont

taxonomie reposait principalement sur des caractères phénotypiques. Aujourd’hui, la chimiotaxonomie (ou taxonomie moléculaire) fait appel à l’analyse moléculaire et utilise entre autre des critères génétiques (hybridation ADN-ADN, séquençage des ARNr 16S, séquençage de divers gènes...) L’absence de définition précise des différents rangs taxonomiques est un obstacle à l’élaboration d’une classification officielle universelle. LES RANGS TAXINOMIQUES BACTERIENS ET LEURS NOMENCLATURES 1.1

lue dans son génome Génome: ensemble des molécules d’ADN contenues dans une cellule Rappels L’ADN est composé de séquences codantes (= gène) et de séquences non-codantes. Il y a plusieurs gènes sur un même chromosome. I – Séquencer et comparer des génomes Séquence: succession ordonnée de nucléotides Comment la séquence du premier génome humain a-t-elle été déterminée? IA – Le séquençage du génome humain Principe de test de paternité Source: gnis-pedagogie.org La méthode de l’électrophorèse

chauffer, pour le dénaturé (c’est a dire de séparé les deux branches de la double hélice), pour produire un brin complémentaire, et un porte modèle pour le séquençage de l’ADN , une amorce est positionner à une des extrémités du brin. Cette amorce est dispersée a volume égal dans 4 tubes à essai, dans lesquels on vas rajouter de l’ADN polymérase,suivie par l’ajout des nulcéotides tri-phosphates, ensuite on vas ajouter un type de nucléotides tri- phosphates spécialement modifié par tube ( Adénine

synthèse des protéines chez les eucaryotes, explique les maturations post-transcriptionnelle et post-traductionnelle . La synthèse des protéines se déroule en quatre étapes : -La transcription : Conversion d'un « < gène » de l'ADN en pré-ARNm ; -La maturation en ARNm : Modifications post-transcriptionnelles des pré-ARNm ; -La traduction : Conversion des ARNm en chaînes polypeptidiques ; -La maturation en protéines : Repliement et modifications de chaînes polypeptidiques. Seules

spécifiques (plus tard qualifiées de "lois de Mendel"). 1866 : Ernst Haeckel propose que le noyau contient les facteurs responsables de la transmission des caractères héréditaires. 1869 : Friedrich Miescher isole l'ADN ("nuclein") pour la première fois. 1871 : Premières publications décrivant l'ADN par Friedrich Miescher, Félix Hoppe-Seyler, et P. Plósz. 1882 : Walther Flemming décrit les chromosomes et examine leur comportement pendant la division cellulaire. 1884-1885 : Oscar Hertwig, Albrecht von

étapes : 11 Chronologie sur le séquençage de l'ADN 1er gène ARN par W. Fiers et al. 1972 Technique de Maxam-Gilbert pour l'ADN 1975 1977 1ère bactérie H. influenzae 1,83 Mb 1977 1er pluricellulaire C. elegans 100 Mb 1996 1er eucaryote S. cerevisiae 12 Mb 1987 1er virus phi X174 par Sanger et al. Technique de F. Sanger et al. pour l'ADN 1995 1er séquenceur Applied Biosystems 1998 Séquençage massif et parallèle 2001 2008

Biologie génique - Pr A. Raisonnier 2006 - 2007 Plan du cours 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 120 121 122 123 7.3 7.4 7.5 7.6 7.7 Extraction de l’ADN Isolation de l’ARN Techniques de purification (tableau) Purification par l’éthanol Purification du RNA-poly(A) Chapitre 8 : 8.1 8.2 8.3 8.4 8.5 8.6 8.7 8.8 8.9 8.10 8.11 8.12 8.13 8.14 8.15 8.16 8.17 8.18 8.19 8.20 8.21 Synthèse des polynucléotides

discussion D. Analyse de l’ADN recombinant I. Principes 1. Extraction d’ADN plasmidique 1. Digestion des plasmides 2. Séquençage par la méthode de Sanger II. Résultats et discussion 1. Gel 1: ADN plasmidiques non digérés 2. Gel 2: ADN plasmidiques digérés par les enzymes 3. Séquençage Conclusion INTRODUCTION La transformation bactérienne utilisant de l’ADN plasmidique modifié par le

Module Génie Génétique et Biotechnologie Végétales Walid Hamada (Maître assistant à l’INAT) Historique de la génétique moléculaire 1869 : Isolement de l’ADN 1944 : Un gène qui porte l’information génétique correspond à une protéine 1953: Watson et Crick découvrent la structure hélicoïdale de l’ADN 1972: Le clonage de l’ADN 1975: Le séquençage des gènes par Sanger 2000: Arabidopsis thaliana, première plante dont le génome entier (100 Mb) a été séquencé Mastère INAT 2009-2010 Module Génie Génétique