Tp Trypsine

Compte rendu TP électrophorèse de protéines électrotransfert et immunorévélation I) But du TP Lors du premier TP, nous avions essayé de purifier une protéine du blanc d’œuf, le lysozyme, par chromatographie échangeuse d’ions. Dans ce TP, nous allons vérifier cette purification à l’aide d’une électrophorèse sur gel de polyacrylamide. Puis afin d’identifier précisément l’enzyme nous effectuerons un électro-transfert suivi d’une immunorévélation. II) Principe A°) Electrophorèse L’électrophorèse

Compte rendu du TP : électrophorèse de protéines, électrotransfert et immunorévélation But : L’objectif principal de ce TP est l’analyse par électrophorèse des protéines récupérées dans différentes fractions lors du TP consistant à extraire une molécule d’intérêt, le lysozyme, du reste des protéines d’un blanc d’œuf. Principes : - Electrophorèse : il s’agit d’une méthode qui permet de séparer et de caractériser des molécules. Elle se base sur le déplacement de molécules chargées sous l’effet d’un

spécifique entre Antigène et la plaque. Marquage par immunocytofluorescence Les différentes étapes de la culture cellulaire : Test ELISA Protocole expérimentale : SaO5-2 (ostéosarcome : attention ports de gants obligatoire)  Lavage au PBS  Trypsine  Décoller les cellules.  Culture de 5000 cellules sur une lamelle de verre. On prend alors une plaques on y met 4 lamelles. On les met 24h en incubation à 37°C. Enfin on traite les cellules. CT et CT- sont non traités et sont des

monosaccharide, qui sont absorbés par l’enterocyte et gagnent le système porte. Les glucides non absorbés sont hydrolysés dans le colon par fermentation. 2) protides apport quotidien = 100g:jr La pepsine gastrique et les protéases pancréatiques (trypsine, chymotrypsine) dissocient les polypeptides en oligopeptides. Ceux-ci sont sont hydrolysés en di-peptides et en acides aminés par l’aminopeptidase de la bordure en brosse de l’entérocyte. Les acides aminés gagnent la veine porte. Les proteines ayant

les réactions chimiques de la façon suivante : E S P (S : substrat , E : enzyme , P : produit) Activité 1.2 : Comment appelle-t-on une enzyme ? Enzyme Glucose oxydase Amylo-synthétase Amylase salivaire Maltase Lactase Saccharase Chymotrypsine Trypsine Substrat Glucose Glucose phosphate Amidon Maltose Lactose Saccharose Protéines (Tyr, Phé, Trp) Protéines (Lys, Arg) Type de réaction catalysée Oxydation Synthèse Hydrolyse Hydrolyse Hydrolyse Hydrolyse Hydrolyse Hydrolyse Notez que généralement

TP chimie physique I Page 1 Semestre d’automne 2007 Elliott Croset Alexandre Dumoulin (Groupe E) CINÉTIQUE I. But de l’expérience Etude de la cinétique d’une réaction catalysée par la trypsine, une enzyme digestive du suc pancréatique. II. Notions théoriques La catalyse par le biais de la trypsine permet d’abaisser l’énergie d’activation d’une réaction donnée, en l’occurrence, l’hydrolyse d’une liaison peptidique dans le BAPNA (N-benzoyl-arginine-p-nitroanilide) qui est soluble dans

ultrastructure Microscopie optique et microscopie électronique Racines  Caryo, cyto, histo, nucléo Les racines correspondant aux différents organes seront mentionnées dans les pôles suivants. Horaires conseillés 4 semaines 12 H cours + 4 H TP |Programme Contenu |Commentaires |Compétences attendues | |1 -Anatomie  |On ne fera pas la différence entre les notions |Savoir

lipides sont hydrophobes. Les lipides peuvent être saturés (graisses → solides à température ambiante) ou insaturés si la chaîne comprend des double liaisons (= perte d’un H) qui forment des angles (→ liquide à température ambiante). Réaction de TP : La pancréatine, enzyme sécrétée par le pancréas, est indispensable à la digestion des lipides. Elle les hydrolyse, c’est-à-dire qu’elle sépare les acides gras des glycérols. La solution obtenue est légèrement acide. Si portée à ébullition, la

Cette réaction permet d'identifier un AA en première position N Terminal e – Réaction de Sanger (Amylation) Cette réaction permet d'identifier un AA en première position N Terminal 4 – Propriétés due à la fonction amine et acide carboxylique ✗ TP pour détecter les AA 5 – Propriétés due à la chaîne latérale R *Phosphorylation ✗ Sérine ou thréonine phosphorylé grâce a des kinases et de l'ATP – Enzyme faiblement active – Enzyme phosphorylé 100 % active – Le contraire est possible

sont les mêmes pour les différents types de vecteurs, bien que les détails techniques puissent être différents. Pour simplifier, nous n'exposerons que les méthodes utilisées pour les vecteurs plasmidiques. Quand on dispose de plasmide purifiés (voir TP purification de plasmides), les ADN circulaires de plasmides sont tout d'abord coupés par une nucléase de restriction afin de créer des molécules d'ADN linéaires. Par ailleurs, l'ADN génomique utilisé pour constituer la banque est lui aussi coupé par