Violet de gentiane

2-3-5-tétrazolium) permet d'obtenir les pigmentations suivantes : C. albicans : blanc (aspect crémeux) C. guilliermondii : rose-rouge C. krusei : blanc (aspect mat) C. parapsilosis, pseudotropicalis, pulcherrima et stellatoïdea : rose C. tropicalis : rouge-violet Gélose Columbia au sang * Usage : Utilisée pour la culture et l’isolement  de bactéries exigeantes n'ayant pas besoin de facteurs particuliers comme Streptococcus. * Composition et préparation : * Mélange spécial de peptones : 23 g

deux types de bactéries présentes dans le yaourt, les lactobacilles et les streptocoques. On veut trouver, s’ils sont à Gram positif, ou négatif. 2) Matériel Matériel biologique - yaourt Matériel chimique - alcool (95%) - violet de gentiane - Lugol - Fuchsine - Eau distillée - Huile d’immersion Matériel physique - Lame/lamelle - Ensemenseur - Cristallisoir - 2 bâtonnets en verre - bec Bunsen - microscope - pipette 3) Déroulement de l’expérience D’abord, on a

Anse de platine. • Etuve à 28° C. • Bec Bunsen • Microscope • Lames Produits utilisé : • Ethanol à 95%. • Solution d’hypochlorite de Calcium à 5 %. • solution de Fushine. • Eau distillée stérile. • Violet de Gentiane. • Lugol • Huile d’immersion. Mode opératoire : ➢ Isolement des bactéries : -Stériliser les nodules par l’éthanol à 95% pendant 3à 10seconde . - Transférer les nodules dans du calcium hypochlorite à 5% pendant 3 minutes. -

TP3 : Antibiogramme a) Identification du gram de la bactérie b) But et principe Préparer sur lamelle une coloration des Grams à l’aide de plusieurs solution : du violet de gentiane, du lugol, de l’éthanol à 70% et de la fuchsine de ziehl. Cette manipulation a pour but de révéler le type de gram de l’échantillon à tester et de savoir si ces souches sont des bacilles ou des coccis grâce à une observation au microscope. c) Résultats Le test de coloration de Gram révèle une coloration rose. J’en

milieux à ensemencer etc… Au terme du processus de coloration, les bactéries dites « Gram Négatives » apparaissent roses tandis que les bactéries dites « Gram Positives » sont colorés en bleu foncé/violet (rem : certaines bactéries telles que les Bacillus, apparaissent parfois roses et violettes sur le même frottis, on les dit « Gram labiles »  et les différences de coloration sont dues à des différences d’âge des bactéries) La coloration de Gram est une coloration qui teste l’alcoolo résistance

colorer les bactéries et de les distinguer à l'examen (le violet de gentiane (Gram +) ou la fuschine (couleur rose) (Gram -). Son avantage est de donner une information rapide sur les bactéries présentes dans un produit ou un milieu tant sur le type que sur la forme. Mode opératoire : * Réaliser un frottis  * Fixer la préparation à la flamme, puis laisser refroidir la lame. * Immerger les lames dans la solution de Violet de Gentiane pendant 1mm. * Immerger les lames dans du Lugol (2

virage (pH) Couleur de l’acide Couleur de la base méthyl violet 0,1 – 2,6 jaune violet vert de méthyle 0,1 – 2,3 jaune bleu violet de méthyle 0,1 – 2,7 jaune violet rouge de crésol 0,2 – 1,8 rouge jaune cristal violet (ou violet de gentiane) 0,8 – 2,6 jaune bleu violet bleu de thymol (1er virage) 1,2 – 2,8 rouge jaune jaune de méthyle 2,9 – 4,0 rouge jaune bleu de bromophénol 3,0 – 4,6 jaune bleu violet rouge congo 3,0 – 5,2 bleu orange rouge orange de méthyle

Milieux sélectifs Chapman 75g/l NACl Cetrimide G grande colonie P P petite Colonie *Colorations de GRAM Fixation Violet de Gentiane 1 seul type de colonie G P halotolérante G cetrimide résistant *Coloration simple au violet Fixation Violet De Gentiane Lugol Décoloration P Coque G Bacille Par déduction : P Gram+ et G Gram- Safranin G Rose Gram – P Violet Gram + 

identification. En effet, le violet de gentiane se fixe sur des composants cytoplasmiques et après ce temps de coloration, toutes les bactéries sont violettes. Chez les bactéries à Gram négatif, la paroi, riche en lipides, laisse passer l'alcool (ou le mélange alcool + acétone) qui décolore le cytoplasme alors que, chez les bactéries à Gram positif, la paroi constitue une barrière imperméable à l'alcool et le cytoplasme demeure coloré en violet. Réactifs : - Violet de gentiane phénique - Lugol (iodo-iodure

technique n°5 : Les colorations de Gram & au bleu de méthylène La coloration de Gram Principe : La coloration de Gram permet de distinguer les bactéries à Gram négatif qui apparaissent roses et les bactéries à Gram positif qui apparaissent violettes. Cette différence de coloration est liée à des différences de nature de la paroi bactérienne. Elle permet de renseigner sur : - le type Gram + ou Gram – ; - la forme des bactéries (coque, bacille) et autre détails morphologiques (extrémités