Yvon Lambert

– Pratiquer une démarche expérimentale pour déterminer  – Dosage de solutions colorées par étalonnage. la concentration d’une espèce à partir d’une courbe d’éta– Loi de Beer-Lambert. lonnage en utilisant la loi de Beer-Lambert. Les compétences à acquérir dans la séquence 1.  Décrire l’évolution d’un système chimique. 2.  Connaître la loi de Beer-Lambert. 3.  Réaliser un dosage par étalonnage. Évaluation diagnostique p. 86 Situation 1 La réaction de photosynthèse, en présence de lumière, peut être modélisée par l’équation :

Exemple : permanganate de potassium : violet, il absorbe du bleu turquoise. Plus l’absorbance est grande plus il y a de soluté dans la solution. Logiciel sur ostra.net Chimie Spectrophotométrie C’est par la relation de la loi de Beer-Lambert [pic] Pour connaître la concentration molaire d’une espèce il suffit de faire une courbe d’étalonnage grâce aux absorbances de solution connue puis de tracer la courbe A=f(c) celle-ci étant une droite passant par l’origine, il ne reste plus

d'onde à laquelle la CF absorbe. On remarque que notre composé CF absorbe à 492nm. A partir de ce spectre d'absorption, nous avons pu déterminer deux paramètres sui sont : - le coefficient d'extinction molaire : Epsilon grâce à la loi de beer-lambert : A=Epsilon.l.C où A = 0.073 ; l = 1cm et C = 1mM -le pic d'absorption. -> Mesure du spectre d'émission au spectrofluorimètre: Le paramètre accessible est le pic d'émission à 515 nm. Pour réaliser ce spectre nous avons excité la molécule

l’ensemble des longueurs d’onde comprises entre deux valeurs choisies par l’opérateur. Schéma : La loi que nous utiliserons afin de caractériser les relations entre les différents facteurs jouant dans l'absorption de la lumière est celle de Beer Lambert. Cette loi établit une proportionnalité entre la concentration d'une entité chimique en solution, l'absorbance de celle-ci et la longueur du trajet parcouru par la lumière dans la solution. VALIDITE DE LA LOI Seulement cette loi entraine de

initiale ∆Do /min (fig2) V de [PNP] apparu par min • Calcul du coefficient d’extinction molaire : Grace à la gamme étalon (fig1-a) on va calculer le coefficient d’extinction molaire ε qui correspond à la pente de la courbe .D’après la loi de Beer-Lambert : A=ε. L .C D’où ∆A= ε.l.∆C donc ∆A/∆C x l= ε ε=0,01632µM-1.cm-1. On a pour A=0,104 une concentration de PNP de 6,25 µM et pour A=0,206 la concentration en PNP est

données de pourcentage de transmettance émis par le spectrophotomètre, les équations T=IIO et T%=IIo×100 % et A=-logT ont été servites pour produire l’équation d’absorbance : A=-logT%100 % Alors, puisque l’équation donnée par la loi de Beer-Lambert (A=εbc) a fait qu’avec cette expérience ε (le coefficient spécifique d’absorbance molaire) et b (le diamètre de la cuvette) demeure constant, l’absorbance est directement proportionnelle à la concentration. Alors, pour cette expérience, l’absorbance

coloration jaune, il est possible, en mesurant l'intensité de la coloration, de suivre l'apparition d'ONP. 2* Principe du dosage Pour mesurer la quantité d'ONP formé on mesure la densité optique du mélange réactionnel. Selon la loi de Beer-Lambert: D.O. = ε C l où: ε - est le coefficient d'extinction molaire C - concentration du ONP formé l - la longueur de la cuve (l=1cm) Il suffit donc de suivre l'évolution de la D.O. (à 420 nm) pour pouvoir déterminer la quantité de L'ONP

A 2 1,8 1,6 1,4 1,2 1 0,8 0,6 0,4 0,2 0 0 0,0002 A = f(c) A = 1821C 0,0004 0,0006 0,0008 0,001 c (m o lL ) / b) Trouver son équation. Préciser les unités. Coefficient directeur de la droite k = 1821 L/mol c) La loi de Beer-Lambert est-elle vérifiée? La courbe obtenue est une droite passant par l’origine A est proportionnel à c ; la loi est vérifiée. 3. Pour étudier la réaction, on opère de la façon suivante : • • • On prépare, dans un bécher, un volume V1 = 5,0 mL d'une solution

calculer la nouvelle concentration. Vcuve = 2ml = 1,75mL de tube A +0,25 mL d’enzyme nPNPP = C.V CPNPP cuve = = CPNPP cuve = = 1,56.10-5 M On en déduit que = 64103 M-1 Concentration de PNP apparut par minute, d'après la loi de Beer Lambert: Concentration de la solution DO = εPNPP .l.C Densité optique Coefficient d'absorption molaire Longueur de la cuve Sans unité mol.L-1 L.mol-1.cm-1 1 cm On peut lire les DO à partir de la courbe étalon. Pour 5.10-5 M de PNP on lit

après apprentissage sur site. ( Programme : Les méthodes spectrophotométriques d'absorption moléculaire dans les solutions dans les domaines IR-Vis-UV. . notion de transmission – absorption – densité optique . loi de Beer-Lambert QT12 Techniques de laboratoire : utilisation du matériel d'analyses physico-chimiques ( Objectif à atteindre : Etre capable d'expliquer le fonctionnement des appareils. Etre capable de mettre en route et utiliser des matériels. (