Cour d'enymologie
Mesure de l’activité enzymatiqaue
Dr AKSAS
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Cinétique enzymatique
La R enzymatique peut être subdivisée en 3 étapes:
1. Phase préstationnaire; 2. Phase stationnaire; 3. Phase post-stationnaire.
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Cinétique Michaelienne
Représentons les vitesses initiales de R en fonction des concentrations du substrats
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Cinétique Michaelienne
Les vitesses mesurées croissent en fonction des concentrations du substrat.
Mais cette relation n’est pas linéaire : le graphe de cette fonction est une hyperbole;
Lorsque la concentration du substrat est nulle la vitesse est évidemment 0, donc l’hyperbole passe
par l’origine du graphe.
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Cinetique Michaelienne
V Vmax
Vmax/2
Km
[S]
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Équation de Michaelis-Menten
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Constante de Michaelis-Menten
• [Km] = mol.L-1 • Le Km exprime l’affinité de E pour S : plus il augmente pour son affinité pour S est faible; • Le Km est une caractéristique pour une enzyme et un substrat donné • Une enzyme peut avoir plusieurs Km • Le Km Permet la comparaison d’enzymes provenant de différents tissus ( isoenzymes) • Pour le dosage des activités enzymatiques au labo son calcul permet le choix du substrat dans la trousse de réactif avec concentration de S = 100 fois Km
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Graphe de Lineweaver-Burk
• C’est la transformation algébrique de l’équation de Michaelis-Menten ( double inverse) • On obtient une courbe linéaire de forme y = ax +b au lieu d’une hyperbole. • Elle permet de mesurer plus facilement les constantes cinétiques Vmax et Km.
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Graphe de Lineweaver-Burk
1/vo
1/Vmax + 1 1 = Km x 1 vo [S] Vmax Vmax 1/[S] -1/Km Graphe de Lineweaver-Burk
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Graphe de Lineweaver-Burk
C’est la façon la plus facile pour déterminer avec précisionVmax et Km Le graphique de 1/V= f (1/[S]) donne une droite dont: Intercepte sur l’axe des x = -1/Km Intercepte sur l’axe des y = 1/Vmax
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Influence de la Température
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Influence du PH
• Il existe