Acétonitrile

TP de BSF1 : DETERMINATION DU SITE ACTIF D’UN PEPTIDE SYNTHETIQUE PAR HPLC  Année 2011/2012 BUT : Le but de ce TP est de déterminer la localisation, dans un peptide, du site d’interaction avec un glycosaminoglycane naturel : l’Héparine. Pour cela, on utilisera une méthode d’analyse et de purification : la chromatographie en phase inversée avec appariement d’ions en HPLC. PRINCIPE : * Chromatographie en phase inversée avec appariement d’ions : Dans la chromatographie en phase inversée

fr/CHIMIE/Chimie1/Chromliq1.htm | COURS SUR CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE | MADAME LIEGEOIS | Cours UCL HPLC | http://www.farm.ucl.ac.be/tpao/tpintegres/HPLC/documents/chapitre3.pdf | Polarité | http://www.lachimie.fr/analytique/chromatographie/HPLC/solvant-HPLC.php | Acétonitrile | http ://ead.univ-angers.fr/~jaspard/Page2/COURS/6CoursDEUST/CHROMATOGRAPHIE/2FIGURES/4PhaseREVERSE/4ProprieteSO/2ACN.htm | Extraction | http://www.interchim.com/interchim/chroma/SommaireCatChromato/A-47-53-ExtractionLiquideLiquide.pdf | Extraction

flurbiprofène est soluble -Facilement soluble dans les solvants organiques Tableau III: Solubilité approximative du flurbiprofène dans différents solvants [21, 22] Solvants | Solubilité | Methanol | 71,4 | ethanol | 35,7 | Acetonitrile(Grade CLHP) | 14 | 45%Acétonitrile,55%eau | 2,3 | Identification Méthode d’identification | Protocole d’identification | Critère d identification | Point de fusion | | 114 °C à 117 °C | Spectrophotométrie d’absorption dans l’ultraviolet et le visible

que des pics larges et bas). La combinaison de ces attributs - rapidité et résolution élevées - conduit à l'appellation « haute performance ». Les solvants utilisés sont des combinaisons miscibles d'eau et de divers liquides organiques (alcools, acétonitrile, dichlorométhane...). Souvent, la composition de la phase mobile est modifiée au cours de l'analyse, c'est le mode dit « gradient » ou « élution graduée » (en opposition au mode « isocratique », pour lequel la composition de la phase mobile reste

polaire migre plus vite qu'un composé apolaire. Dans ces conditions les hydrocarbures sont fortement retenus. On réalise des gradients d'élution en diminuant au cours de la séparation la polarité de l'éluant (ex : mélange eau /acétonitrile dont la concentration en acétonitrile va en croissant au cours de l'élution). On peut, en mélangeant plusieurs solvants, ajuster le pouvoir d'élution de la phase mobile. Š Š Fi . 3 : v ir ¶él ti l bil POMPE Š Š Š Š Elle est munie

polaire migre plus vite qu'un composé apolaire. Dans ces conditions les hydrocarbures sont fortement retenus. On réalise des gradients d'élution en diminuant au cours de la séparation la polarité de l'éluant (ex : mélange eau /acétonitrile dont la concentration en acétonitrile va en croissant au cours de l'élution). On peut, en mélangeant plusieurs solvants, ajuster le pouvoir d'élution de la phase mobile. [pic] f) Détecteurs Deux types de détecteurs sont classiquement utilisés * détecteur UV-visible (celui

Entreposer ce produit au frais et au sec, à l'écart de la nourriture humaine ou animale et des boissons. 8 Réactifs Sauf mention contraire, les solutions restent valables jusqu’à ce que les critères de validité de l’analyse soient respectés. 1 Acétonitrile de qualité HPLC (Biosolve ou équivalent) 2 Méthanol de qualité HPLC (Fisher Scientific ou équivalent) 3 HClO4 60 % (Normapur VWR ou équivalent) 4 Eau ultrapure de type I à 18,2 MΏ.cm 5 HCl 1mol/l (Titripack, Merck ou équivalent) 6 KH2PO4

(190-600 nm). II. CALCULS ET RESULTATS : Calcule du volume mort de la colonne : Soit 150 = 1.495 ml INFLUENCE COMPOSITION DE L’ELUANT : Résultats : Séparation d’un Mélange Théophylline/Caféine en fonction de la concentration en éluant: % acétonitrile Pression Tr 1 Tr2 N (Tr1) N(Tr2) Résolution 15% 117 bar 2.071 2.786 6082.89 8135.85 6.22 18% 115 bar 2.435 3.631 6627.69 9410.45 8.9 21% 112 bar 1.857 2.342 7491.19 7803.05 5.07 On voit que la résolution la plus grande correspond à une proportion

électrodes, on réduit la résistance interne, accroissant du même coup l'énergie offerte : # L'oxydant, dioxyde de soufre sous forme liquide, imprègne la cathode en graphite poreux. # L'électrolyte sans trace d'eau est un mélange organique (acétonitrile carbonate de propylène) additionné de bromure de lithium. Le produit formé à partir de la réaction d'oxydo-réduction, le dithionite de lithium, vient y précipiter. # Le réducteur est le lithium, métal mou qui se prête facilement à la fabrication

polaire migre plus vite qu'un composé apolaire. Dans ces conditions les hydrocarbures sont fortement retenus. On réalise des gradients d'élution en diminuant au cours de la séparation la polarité de l'éluant (ex : mélange eau / acétonitrile dont la concentration en acétonitrile va en croissant au cours de l'élution). On peut, en mélangeant plusieurs solvants, ajuster le pouvoir d'élution de la phase mobile. III. Chaîne HPLC: Présentation du matériel. (Figure 1) [pic] (Figure 2)